好酸性細菌のrecA遺伝子の構造解析と特異株の作成

嗜酸菌recA基因结构分析及独特菌株的创制

• 批准号: 05760073
• 负责人: 稲垣 賢二
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760073/
• 关键词: 好酸性細菌; Acidiphilium facilis; RecA蛋白質; recA欠損変異株; recA遺伝子; DNA配列

1.好酸性細菌のrecA遺伝子の構造解析好酸性細菌Acidiphilium facilis ATCC35904株のrecA遺伝子を含むプラスミドpAFR1の制限酵素地図を作製した後,MMS(メチルメタンスルホン酸)耐性及びUV耐性を指標にしてサブクローニングを行い,挿入断片を2.2kbまで小型化したプラスミドpAFR101を得た。pAFR101の2.2kbのDNA断片を用いてrecA遺伝子の塩基配列をダイデオキシ法により決定した。A.facilisのrecA遺伝子は,354アミノ酸をコードする1062bpのオープンリーディングフレームからなり,コード領域のGC含量は62%であった。2.A.facilis recA欠損変異株の作成recA遺伝子の塩基配列及び制限酵素地図を参考にして,recAの構造遺伝子中のEcoR1部位にカナマイシン耐性遺伝子を挿入した変異遺伝子を作成した。作成した変異遺伝子をエレクトロポレーションによりA.facilis中に導入した後,カナマイシン耐性を示した株を選抜しrecA欠損変異株A.facilis OU1株を得た。recA変異株を用いた形質転換得られたA.facilis OU1株を宿主として,好酸性細菌用ベクター(pAH101,pAS101)による形質転換を行ったところ,定常期の菌体からもプラスミドが単離でき,組み込みを起こしていないことが判明した。本研究により,好酸性細菌Acidiphilium facilisの安定な宿主が調製できた。

1. Analysis of the Structure of the 伝 subcilla of the well-acidic bacterium bacterium recA Acidiphilium facilis Contains ATCC35904 strains の rec a posthumous son 伝 を む プ ラ ス ミ ド pAFR1 limitations の enzymes to 図 を cropping し た, MMS (メ チ ル メ タ ン ス ル ホ ン acid) patience and び UV patience を index に し て サ ブ ク ロ ー ニ ン グ を い, scions into fragment を 2.2 KB ま で miniaturization し た プ ラ ス ミ ド pAFR101 を た. PAFR101 の 2.2 KB の DNA fragment を with い て rec a posthumous son 伝 の salt base with column を ダ イ デ オ キ シ method に よ り decided し た. A.f acilis の rec a heritage 伝 は, 354 ア ミ ノ acid を コ ー ド す る 1062 bp の オ ー プ ン リ ー デ ィ ン グ フ レ ー ム か ら な り, コ ー ド field の GC content は 62% で あ っ た. 2. A.f acilis rec a less loss - traces of different strains の rec a consummate 伝 son の salt base with column and the limitations び enzyme 図 を reference に し て, rec a の tectonic heritage 伝 of の EcoR1 parts に カ ナ マ イ シ ン patience heritage 伝 son を scions into し た - different heritage 伝 son を made し た. Son made し た - different heritage 伝 を エ レ ク ト ロ ポ レ ー シ ョ ン に よ り A.f acilis に in import し た after カ ナ マ イ シ ン patience を shown し た を strains selected sorting し rec a owe loss - different strains A.f acilis OU1 た を strains. Rec a - different strains を with い た form quality planning in ら れ た A.f acilis OU1 strains を host と し て, good acid bacteria with ベ ク タ ー (pAH101 pAS101) に よ る form quality planning in line を っ た と こ ろ, stationary phase の bacteria か ら も プ ラ ス ミ ド が 単 from で き, group み 込 み を up こ し て い な い こ と が.at し た. In this study, によ によ, aerobic acidic bacteria Acidiphilium facilis, <s:1> diazolium な host が modulation で た た.

项目成果

Kenji Inagaki: "Transformation of the Acidophilic Heterotroph Acidiphilium facilis" Bioscience Biotechnology and Biochemistry. 57. 1770-1771 (1993)

Kenji Inagaki：“嗜酸异养嗜酸菌的转化”生物科学生物技术和生物化学。