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メダカ胚細胞CIチャネルのシングルチャネル解析と初期胚細胞分化機序

青鳉胚胎细胞CI通道单通道分析及早期胚胎细胞分化机制

基本信息

批准号：
05770028
负责人：
重本尚
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

メダカ胚胞胚期初期までは細胞分裂は同期しており、存在するmRNAはすべて卵母細胞由来である。胞胚期中期より接合子由来のmRNAの転写が始まり、細胞分裂は非同期となる。これはmidblastula transitionと呼ばれている。申請者は従来、ホールセル電圧固定法による電気記録で胞胚期初期にはカルシウム(Ca)依存性のクロライド(Cl)電流が存在し、胞胚期後期には半数の細胞においてCa依存せず、膜電位依存性の高いCl電流が出現することを明らかにした。本研究ではシングルチャネル記録を行い、以下の結果を得た。1.胞胚期初期のClチャネル(1)単位伝導度は非常に小さく6pSであり、バーストが観察された。膜電位依存性があり、1分以上の脱分極により著明に開確率が増加した。セルアタッチ記録では平均開時間は5msecであった。インサイド-アウト記録ではチャネルの開確率は細胞内液のCa濃度に依存したが、平均開時間は0.5msecと著明に減少した。この減少は細胞内のなんらかの因子がインサイド-アウトにすることにより洗い流される可能性を検討したが、ATP,cyclicAMP,PKAのcatalitic subunitによっては回復は観察されなかった。(2)生理的条件でのCaイオンの効果を検討するためにセルアタッチ記録においてCaイオノフォアであるイオノマイシンを投与した。この場合の開確率の増加においては平均開時間は変化せず、バーストの持続時間の延長によると結論された。(3)セルアタッチ記録でピペット内のDIDS濃度が500muMの場合にはチャネルの開口は全く観察されなかった。100muMの場合には、チャネルの平均開時間は1.6msecと著明に減少したためDIDSはopen channel blockerであり、平均開時間を短縮することにより抑制すると結論された。2.胞胚期後期のClチャネルの単位伝導度は約4pSであり、膜電位依存性が強く活性化には脱分極が必要であり、インサイド-アウト記録ではカルシウム非存在下でもチャネルの開口が観察された。

In the early stage of the embryo stage, the cell division occurs in the early stage of the embryo, and there is a mRNA cell in the same period. The origin of the zygote in the metaphase of the embryonic stage is the origin of the zygote. MRNA writes the initial zygote and the cell division is not the same as the cell division. I don't know if I'm midblastula transition. In recent years, applicants have reported that the early-stage cell cycle (Ca) dependent cycle cycle (Cl) current, half of the late-embryo phase cell cycle Ca dependence, and membrane potential dependence high-voltage Cl current are sensitive to cell cycle. In this study, the results of the following results are satisfactory. 1. In the early stage of the embryonic stage, the degree of Cl infection (1) is very small, the degree of 6pS is very small, and the temperature is very small. Membrane potential dependence, the score of more than 1 point is very important to indicate that the operating rate increases significantly. On average, the average time of the opening of 5msec records is high and low. The operating rate of intracellular fluid (Ca) is highly dependent, and the average opening time of 0.5msec is very low. There are many factors in the cell, such as the number of factors, the possibility of washing the flow, the possibility of washing, the possibility of washing, the possibility (2) physiological conditions such as Ca