恙虫病リケッチアの病原因子の解析及びこのリケッチアの分類学的位置付けに関する研究

立克次体致病因素分析及立克次体分类定位研究

• 批准号: 05770198
• 负责人: 大橋 典男
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nigata University of Phermacy and Applied Life Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770198/
• 关键词: 恙虫病; R.tsutsugamushi; PCR; 型特異的抗原; 16SリボソームRNA

1.恙虫病リケッチアの56kDa蛋白の発現系の開発我々はこれまでにこのリケッチアの表在性56kDa蛋白がリケッチアの血清型を決定すること等を明らかにし、さらにこの蛋白の遺伝子解析からその全アミノ酸配列を決定した。本研究はこの蛋白の病原因子としての役割を解析するため、大腸菌でこの56kDa蛋白を発現させる系の開発に努めた。56kDa蛋白の遺伝子領域をPCR法により増幅し、pETベクターに組み込んで、その大腸菌組み換え体を得た。次にIPTGでこの組み換え体の発現を誘導した結果、誘導後数時間後に56kDa蛋白が大腸菌の蛋白中で最も主要な蛋白として認められた。すなわち、我々が構築した発現用プラスミドは多量の56kDa蛋白の発現を可能にすることが判明した。これにより今後この蛋白の機能解析が可能となり、さらに診断用抗原としての利用も可能となるものと期待される。2.恙虫病リケッチアの16SrRNA遺伝子解析による分類学的位置付けに関する研究リケッチア属はチフス群、紅斑熱群及び恙虫病群の3群に分類される。本研究では恙虫病リケッチアの16SrRNA遺伝子をPCR法より増幅し、その塩基配列をダイレクトシーケンス法より決定して、それらを他群のリケッチアの配列と比較した。その結果、チフス群及び紅班熱群リケッチアの3菌種間では6-27個の塩基置換が見られ、その相同性は98.1-99.6%であった。また、恙虫病リケッチアの株間では9個の塩基置換が見られ、その相同性は99.4%であったが、他群のリケッチアとの間では約140個の塩基置換が認められ、その相同性は90%であった。この結果は恙虫病リケッチアがリケッチア属の中で他群のリケッチアと離れた関係にあることを示すものであり、このリケッチアに分類学上、他のリケッチアを区別される新たな属名が付されるべきであると考える。

1. Development of a 56kDa protein production system for tsutsugamushi disease and determination of the serotype of the 56kDa protein present in the protein. This study is aimed at the development of a system for the analysis of pathogenic factors and the production of 56kDa proteins in E. coli. 56kDa protein fragment was amplified by PCR, pET, and E. coli. The 56kDa protein is the most important protein in Escherichia coli after induction. It is possible to identify the presence of a large amount of 56kDa protein in the presence of a protein construct. The functional analysis of this protein is possible and expected in the future. 2. The taxonomic position of the 16S rRNA gene of tsutsugamushi disease is related to the taxonomic classification of three groups of tsutsugamushi disease, i.e., red spot fever group and tsutsugamushi disease group. In this study, the PCR method was used to determine the amplification and alignment of 16S rRNA genes in tsutsugamushi disease. The results showed that 6-27 base substitutions were found among the 3 species, and the identity was 98.1-99.6%. 9 base substitutions were found among strains of tsutsugamushi disease, 99.4% of which were identical, and 140 base substitutions were found among strains of tsutsugamushi disease, 90% of which were identical. The results show that the new genus name of tsutsugamushi is different from that of other genera in taxonomy.

项目成果

N.Ohashi et al.: "Purification and partial characterization of type-specific antigen of Rickettsia tsutsugamushi." Infect.Immun.57. 1427-1431

N.Ohashi 等人：“恙虫病立克次体特异性抗原的纯化和部分表征。”

N.Ohashi et al.: "Characterization of a new antigenic type,Kuroki,of Rickettsia tsutsugamushi isolated from a patient in Japan." J.Clin.Microbiol.28. 2111-2113

N.Ohashi 等人：“从日本患者体内分离出恙虫病立克次体的新抗原类型 Kuroki 的特征。”