レトロウイルスの複製と細胞のスプライシング機構との関係の解明

阐明逆转录病毒复制与细胞剪接机制之间的关系

• 批准号: 05770206
• 负责人: 小田原 隆
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770206/
• 关键词: RNAスプライシング; レトロウイルス; 分子生物学

本研究は、レトロウイルスが、env-mRNAへとスプライスされるはずのRNAを、非スプライスRNAのままでも核から細胞質へ移送している機構を解明することを目的に行なった。マウス白血病ウイルスのGag蛋白を効率よく発現するウイルスベクターを構築する際に、pol領域に2.4kbの欠失をもち、gag及びenvをコードするウイルスGE6.4は、よくGag(並びにEnv)蛋白を発現したが、GE6.4から残存pol-env部分の殆どを欠失し、gagだけをコードするようにしたG3.6では、RNA、蛋白の発現が大きく減少した。この原因として、Env蛋白発現の有無は無関係だったが、GE6.4からスプライスアクセプターを含む441塩基を欠失すると、gag-RNAの発現がG3.6と同じレベルまで低下することが分かった。G3.6のgag遺伝子下流にこの441塩基部分だけを戻すことで、gagをコードする非スプライスRNA量を上昇し、Gag蛋白発現を回復できた。しかし、GE6.4で、この441塩基部分を逆位させても、欠失させた場合と同様にgag発現量が減少したので、この部分はエンハンサーとして機能しているわけではない。核と細胞質とを分けてRNA量を比較したところ、G3.6の非スプライスRNAは、GE6.4に比して、核内に多く留まっていることが分かった。従って、スプライスアクセプターを欠くG3.6のRNAは、核から細胞質への移行が悪く、核内で壊れてしまうため発現量が低下すると結論された。gag遺伝子をneomycin耐性遺伝子に変えた場合には、上のような現象は認められず、スプライスアクセプターの有無に係わらず、非スプライスRNAが効率よく発現した。gag遺伝子が自らのRNA(=非スプライスRNA)発現のためにスプライスアクセプターを必要とすることは、ウイルスが非スプライスとスプライス両方のRNAを発現する上で合理的であると考えられるが、gag遺伝子配列内にそのような決定配列があるのかは今後の検討を要する。

The purpose of this study is to clarify the mechanism of cytoplasmic transfer of RNA and non-RNA in the genome. During the construction of leukemia cell, the 2.4kb gap in pol domain, gag and Env were significantly reduced in GE6.4 and GE6.4 respectively. The reason for this is that the presence or absence of Env protein expression has nothing to do with GE6.4, G3.6 and G441 gene deficiency. G3.6 gag gene downstream 441-mer part of the protein expression increased, Gag protein production recovered. GE6.4, GE441, GE6.4, GE6.4, GE6.4, The amount of RNA in the cytoplasm of the nucleus was compared with that in the cytoplasm of the nucleus. The amount of RNA in the cytoplasm of the nucleus was compared with that in the cytoplasm of the nucleus. The results showed that the RNA of G3.6 was lower in the cytoplasm and in the nucleus than in the cytoplasm. The presence or absence of a gag gene or neomycin resistant gene in a variety of situations may result in the presence or absence of an RNA gene. It is necessary for the development of gag gene from RNA(= non-protein RNA). It is necessary for the development of gag gene from RNA (= non-protein RNA).