C型肝炎ウィルス抗原の肝組織内局在に関する免疫電顕的検討

丙型肝炎病毒抗原在肝组织中定位的免疫电镜研究

• 批准号: 05770343
• 负责人: 斎藤 貴史
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770343/
• 关键词: C型肝炎; 免疫組織; 肝臓

1.C型肝炎ウィルス(HCV)抗原の肝細胞内局在検討HCV CORE領域の合成ペプチドを用いて作成した特異抗体にて本抗原の肝細胞内局在を免疫組織学的手法を用いて検討した。免疫伝顕法にて、HC本抗原の局在を観察し得た。per-embedding法を用いたが、HCV抗原に対するペルオキシダーゼ反応を電顕下に観察することに成功した。HCV粒子の細胞内形成過程については、現在、さらに症例を重ね検討している。Lawicryl K4M樹脂を用いたpost-embedding法を行ったが、本法ではHCV抗原の検出はできなかった。さらに反応条件等の検討を加えている。CORE領域に加えて、ENVELOPE領域の特異抗体を作成中である。2.HCV遺伝子(HCV-RNA)の肝細胞内局在検討HCV遺伝子の5'非翻訳領域の合成プライマーをDNA合成機を用いて作成した。本プライマーにジゴキシゲニンを標識し、肝生検新鮮凍結標本を用いて、in situ hybridization法にて、肝細胞内HCV-RNAの検出を行った。その結果、HCV-RNA陽性細胞を光学顕微鏡下に観察することが可能であった。HCV-RNA陽性細胞は、肝組織内で散在して局在していた。HCV-RNA陽性細胞と上述のHCV CORE抗原陽性細胞の分布様式について、光学顕微鏡的に解析したが、概ね局在は一致するものの、不一致例もあり、その意義については、今後の研究課題である。HCV-RNAの局在については、肝組織上でpolymerase chain reaction法を行い更に検出感度をあげられないか検討した。現在、ギゴキシゲニン法にて肝生検組織上での検出をおこなっている。

1. Hepatitis C virus (HCV) antigen in liver cells in the study of HCV CORE domain synthesis and development of specific antibodies to this antigen in liver cells in the study of immunohistological methods The immune system was developed and HC antigen was detected. The per-embedding method was successful. HCV particle formation in the cellular process of the past, present, and future cases of re-examination Lawicryl K4M resin is used in post-embedding method. This is the first time that we've seen this. CORE domain, ENVELOPE domain specific antibody production 2. HCV RNA was synthesized by DNA synthesizer in 5'non-reverse domain of HCV RNA in hepatocyte. This label was used to identify the liver tissue, freshly frozen liver tissue was used, and HCV-RNA was detected in liver cells by the in situ hybridization method. The results showed that HCV-RNA positive cells could be detected under optical microscope. HCV-RNA positive cells were scattered in liver tissue. HCV-RNA positive cells and HCV CORE antigen-positive cells described above are analyzed by optical microscopy, and the results are consistent, inconsistent, and meaningful. Future research topics are expected. HCV-RNA is detected by polymerase chain reaction in liver tissue. Now, we're going to have to go through the process of producing the right kind of tissue.