ヒト肝癌細胞由来血管新生物質の同定と分析

人肝癌细胞来源的血管生成物质的鉴定与分析

• 批准号: 05770357
• 负责人: 加藤 淳二
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770357/
• 关键词: 肝細胞癌; 培養細胞; 血管新生因子

固形腫瘍組織の発育増殖には栄養血管の構築が必須であり,特に肝細胞癌では顕著な毛細血管網の新生を来たし,これには肝細胞癌由来の血管誘導物質が重要であると考えられるが,その詳細は明らかにされていない。本研究では培養ヒト肝細胞癌株であるHUH-6,HUH-7,PLC/PRF/5,HLE,HLF,およびHepG2のcell extractを用いて,牛副腎由来毛細血管内皮細胞(BCEC)の増殖を刺激する活性の有無を,トリチウムチミジンの取り込みでを検討した。その結果,特にHLEのcell extract中にBCECの増殖を対照の約5倍刺激する活性が存在することが明らかとなった。また、このHLE細胞由来のBCEC増殖刺激活性は,80℃,10分間の加熱処理により失活し,蛋白質である可能性が考えられた。この活性はheparin-Sepharose beadsに吸着されず,heparin非結合性であると考えられる。また,HLEのcell extract中には線維芽細胞の増殖を誘導する活性も含まれており,血管内皮細胞増殖活性のさらなる精製,分析が必要であると考えられる。現在すでに入手可能となっている血管新生因子の中和抗体による中和試験ならびに,家兎眼球結膜を用いてin vivoにおける血管新生作用の有無につき検討中である。今後,HPLCなどで本生理活性物質の精製,分析を予定している。

The growth and development of solid tumor tissues require the construction of blood vessels, especially in hepatocellular carcinoma, which is the origin of angiogenesis. In this study, we investigated the activity of bovine accessory kidney derived capillary endothelial cells (BCEC) stimulated by cell extracts from cultured hepatocellular carcinoma cell lines HUH-6,HUH-7,PLC/PRF/5,HLE,HLF, HepG2 and their growth and development. The results showed that BCEC proliferation in HLE cell extract was stimulated by 5-fold activity. BCEC proliferation stimulation activity of HLE cells was inactivated by heat treatment at 80 ℃ for 10 minutes, and the possibility of protein inactivation was examined. The activity of this enzyme is heparin-Sepharose beads, and heparin is not bound. In addition, the cell extract of HLE contains the activity of inducing proliferation of vascular endothelial cells and the activity of purification of vascular endothelial cells. It is possible to investigate the presence or absence of angiogenesis in vivo by neutralizing antibodies to angiogenic factors. In the future,HPLC will be used to refine and analyze the physiologically active substances.