HCV導入肝細胞を用いたラジカル誘導性DNA傷害機構の解明とそれに基づく治療戦略

利用 HCV 转染的肝细胞阐明自由基诱导的 DNA 损伤机制以及基于该机制的治疗策略

• 批准号: 14570487
• 负责人: 加藤 淳二
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14570487/
• 关键词: HCV; HuH7; TGF-α; HCV core; reporter assay; oxidative stress; Huh7; 8-OHdG; HCV Core; Core

HCV core蛋白は細胞にoxidative stressを引き起こし、NF-kBなどの転写因子を活性化することが報告されているが、その下流の標的遺伝子は不明である。本研究では、genotype 1b型のHCV core蛋白の発現plasmid(pcHCV/core)をヒト肝癌細胞(HuH7)にリポフェクトアミンを用いてトランスフェクションした。G418 selection後、Core蛋白の発現をRT-PCR法ならびにウエスタンブロット法で確認した。HCV core蛋白を発現したHuh7細胞では、IkBのリン酸化・分解を伴った転写因子NF-κBの活性化が観察された。Core蛋白の導入によって、発現が変化した遺伝子群をcDNA microarray法で探索したところ、プロモーター領域にκB配列し増殖に関連する標的遺伝子候補としてTGF-αが見出された。そこで、TGF-αプロモーター領域をLuc遺伝子に連結しトランスフェクションしたところ、Core蛋白の発現量に依存してTGF-α転写が増加することを確認した。またHCV core蛋白を発現したHuh7では、親株に比べて、^3H-thymidineの取り込みが有意に亢進し、その効果はTGF-α抗体処理でキャンセルされた。以上の結果、HCV core蛋白は酸化ストレスを引き起こすとともにNF-κB依存性にオートクリン増殖因子としてTGF-αを産生させる作用があると考えられた。

HCV core protein causes oxidative stress in cells, and NF-kB is activated in cells. In this study, plasmid(pcHCV/core) expression of HCV core protein of genotype 1b was investigated in hepatocellular carcinoma cell line (HuH7). After G418 selection, the expression of Core protein was confirmed by RT-PCR. HCV core protein expression in Huh7 cells, IkB activation and degradation, and NF-κB activation were observed. cDNA microarray method was used to explore the expression and transformation of Core protein in cDNA microarray. The target gene candidate of kB gene expression and transformation of TGF-α gene expression was found. We confirm that TGF-α protein expression is dependent on the increase in the expression of Core protein in the domain of Luc protein. HCV core protein was detected in Huh7 cells, which were treated with TGF-α antibody. The above results show that HCV core protein expression is dependent on NF-κB and TGF-α.

项目成果

Sasaki, H., Kato J, et al.: "Induction at Heat Shock Protein 47 Synthesis by TGF-beta and IL-1beta Via Enhancement of the Heat Shock Element Binding Activity of Heat Shock Transcription Factor 1"J Immunol. 168・10. 5178-5163 (2002)

Sasaki, H., Kato J, et al.：“通过增强热休克转录因子 1 的热休克元件结合活性诱导 TGF-β 和 IL-1β 合成热休克蛋白 47”J 免疫学杂志。 .5178-5163 (2002)

Takahashi, M., Kato J et al.: "E1B-55K-Deleted Adenovirus Expressing E1A-13S by AFP-Enhancer/promoter is Capable of Highly Specific Replication in AFP-Producing Hepatocellular Carcinoma and Eradication of Established Tumor"Mol Ther. 5・5. 627-634 (2002)

Takahashi, M., Kato J 等人：“通过 AFP 增强子/启动子表达 E1A-13S 的 E1B-55K 删除腺病毒能够在产生 AFP 的肝细胞癌中进行高度特异性复制并根除已形成的肿瘤”Mol Ther. 5。・5。627-634（2002）

Kato J, Sato Y, et al.: "Ethanol Induces Transforming Growth Factor-α Exiwession in Hepatocytes, Leading to Stimulation of Collagen Synthesis by Hepatic Stellate Cells"Alc Clin Exp Res. (印刷中). (2003)

Kato J、Sato Y 等人：“乙醇诱导肝细胞中的转化生长因子-α 释放，导致肝星状细胞刺激胶原蛋白合成”Alc Clin Exp Res（出版中）。

Kato J, Sato Y, et al.: "Ethanol induces transforming growth factor-alpha expression in hepatocytes, leading to stimulation of collagen synthesis by hepatic stellate cells."Alc Clin-Exp Med. 27. 58S-63S (2003)

Kato J、Sato Y 等人：“乙醇诱导肝细胞中转化生长因子-α 的表达，从而刺激肝星状细胞合成胶原蛋白。”Alc Clin-Exp Med。

Hisai H, Kato J, et al.: "Increased expression of angiogenin in hepatocellular carcinoma in correlation with tumor vascularity"Clin Cancer Res. 9. 4852-4859 (2003)

Hisai H、Kato J 等人：“肝细胞癌中血管生成素的表达增加与肿瘤血管分布相关”Clin Cancer Res。