脳アミロイド蛋白の線維形成

脑淀粉样蛋白原纤维形成

• 批准号: 05770420
• 负责人: 内原 俊記
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770420/
• 关键词: Alzheimer病; Amyloid beta protein; aggregation; heparin sulfate

1.アルツハイマー病脳におけるアミロイド線維形成を観察する目的で,そのコアとなる分子の候補としてヘパラン硫酸を考え,その局在をmonoclonal抗体(HepSS-1:mouse IgM Kappa,抗ヘパラン硫酸マウスモノクローナル抗体)を用いて免疫組織化学的に同定した.ヘパラン硫酸様免疫活性は老人斑のみでなく,神経原線維変化にも確認できた.さらにアミロイド線維形成の場として実験を進めるため,ヘパラン硫酸をニトロセルロース膜等に固着させることを検討したが,ヘパラン硫酸を免疫組織化学的には同定できなかった.そこでアミロイド線維形成の場としてのヘパラン硫酸を得るために,脳以外でのヘパラン硫酸の局在免疫組織科学的に検討した.牛の新鮮死後組織を4%パラホルムアルデヒドで固定し、30ミクロンの浮遊切片を作製し,免疫組織化学的に染色した.腎糸球体の基底膜、大血管の中膜等に比較的大量のヘパラン硫酸様免疫活性を見出したが,肝臓,脾臓には明らかな免疫活性は確認できなかった.2.一方でアミロイド蛋白の線維形成や凝集を見るためにamyloidgenic fragmentの精製を試みた.ヒト髄液,培養細胞上清,アミロイド前駆体蛋白の717残基に点突然変異を有するアルツハイマー病患者のリンパ球をtransfectした培養上清等にamyloidgenic fragmentの存在が期待されるため,これらを様々な方法で精製したのちSDS-PAGEに展開しベータプロテインの存在を確認しようとしたが,通常のWestern blotではこれらのfragmentの存在は確認できなかった.今後はベータプロテインの蛋白化学的な同定法を確立したうえで,ペプチドの合成を蛋白レベルあるいは遺伝子をもちいた手法を駆使して行い,ベータプロテインの沈着機序を明らかにすることを目標とする.

1. For the purpose of detecting the formation of vascular disease, all molecular candidates for HepSS-1:mouse IgM Kappa (anti-HepSS-1) were identified by immunohistochemistry. The immune activity of sulfuric acid is confirmed by the changes of neurogenesis. In addition, the field of linear dimensional formation was determined by immunohistochemical staining. In the field of immunology, the development of a new type of immune system is discussed. Fresh postmortem bovine tissues were fixed in 4% of cases and stained with immunohistochemistry in 30 cases. A large number of anti-inflammatory immune activities were observed in the basement membrane of kidney spheroid, middle membrane of large blood vessels, etc. The presence of amyloidgenic fragment was expected in culture supernatant, culture supernatant, and normal Western blot. In the future, the determination method of protein chemistry in the field of protein synthesis will be established, and the synthesis of protein in the field of protein synthesis will be carried out in the field of protein synthesis.

项目成果

Uchihara, T. Kondo H. Ikeda K.: "Histochemical approach to argyrophilic structures in Alzheimer brain" Pathology and Clinical Medicine. 12. 163-168 (1994)

Uchihara, T. Kondo H. Ikeda K.：“阿尔茨海默病大脑中嗜银结构的组织化学方法”病理学和临床医学。

Tamaki M, Ohno K, Asano T, Niimi Y, Uchihara T, et al: "Cryptic arteriovenous malformation of the choroid plexus of the fourth veutricle" Neurologia medico chirurgica. 34. 38-43 (1994)

Tamaki M、Ohno K、Asano T、Niimi Y、Uchihara T 等人：“第四室脉络丛隐匿性动静脉畸形”Neurologia medico chirurgica。

Kaneko K, Seki K, Ishida K, Uchihara T. et al: "Circulating autoantibody to mature neurons and astrocytes of humans and some mammals present in a demented patient" European Neurology. 33. 450-453 (1993)

Kaneko K、Seki K、Ishida K、Uchihara T. 等人：“痴呆患者体内存在针对人类和某些哺乳动物的成熟神经元和星形胶质细胞的循环自身抗体”欧洲神经病学。

Mitoma H, Uchihara T, et al.: "Action myoclonus induced by visually guided movement" Journal of Neurology. 241. 92-95 (1993)

Mitoma H、Uchihara T 等人：“视觉引导运动诱发的动作肌阵挛”神经病学杂志。