PCR法を用いたヘルペス脳炎の早期診断

PCR法早期诊断疱疹脑炎

• 批准号: 05770442
• 负责人: 植田 美加
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770442/
• 关键词: 単純ヘルペス脳炎; Polymevase Chuir Reaction(PCR)

髄膜脳炎を疑った患者 53人より得られた髄液100mulよりDNAを抽出し、nested PCRを施行した。プライマーは単純ヘルペスウイルス(以下HSV)中の糖蛋白Dの領域内の20bpに相当する2組を使用し137bpを増幅した。そのPCR産物を2%アガロースゲルで電気泳動後、エチジウムブロマイドを用いて染色した。さらにサザンブロッティングにてニトロセルロースフィルターにDNAをトランスファー後、137bpの中央に位置する合成DNAをプローブにしてハイブリダイゼーションを行い、特異的バンドを検出した。陽性コントロールとしてHSV-DNA(vero細胞に感染させた濃度既存のもの)を用いた希釈系列をつくり、そのオートラジオグラフィーのバンドの濃さと比較して、患者髄液中のHSVコピー数を判定した。この陽性コントロールの段階希釈法により、本システムにおいては髄液中からは2pfuのウイルス量まで検出可能であり、デンシトメトリーを使用して測定したバンドの濃さとウイルス量との間に検量線が描け、患者髄液との比較よりそのウイルス量の推測が可能であった。臨床的に単純ヘルペス脳炎と診断され髄液ヘルペス抗体価(ELISA)陽性の8例は全例PCR法で陽性であった。起因ウイルス不明で無菌性髄膜炎と診断された28例中9例がPCR法で陽性であった。このうち経過を追ってウイルス抗体価を測定し得た7例では全例ウイルス抗体価陽性であった。経過を追えた一症例ではアシクロビル治療により発病後約19日でHSV-DNAが陰性化した。この他陰性コントロールとして施行したギランバレー症候群、CIDP、多発性硬化症、脳梗塞、脊髄小脳変性症の髄液中にはHSV-DNAは検出されなかった。PCR法による単純ヘルペス脳炎の臨床診断は、測定が迅速であり経過を追ってウイルスの確認ができること、非特異反応が少ないことから極めて有用であると考えられた。

53 cases of viral infection were detected and 100mul of DNA was extracted and nested. In the domain of glycoprotein D, two groups of 137bp were used. The PCR product was stained with 2% of the protein after electroporation The DNA sequence of the 137 bp DNA sequence was analyzed by using the DNA sequence analysis method. The number of HSV DNA in the patient's serum was determined by comparing the concentration of HSV DNA in the positive serum with the concentration of HSV DNA in the positive serum. The positive rate of the disease is higher than that of the normal rate of the disease. The positive rate of the disease is higher than that of the normal rate of the disease. The positive rate of the disease is higher than that of the normal rate of the disease. The clinical diagnosis was positive by ELISA, but positive by PCR. 9 of 28 cases of asepsis of unknown origin were positive by PCR. 7 cases were found to be positive for anti-virus. In one case, HSV-DNA was negative about 19 days after treatment. HSV-DNA is detected in the serum of patients with multiple sclerosis, CIDP and spinal cord disease. PCR is a simple and rapid method for clinical diagnosis of inflammatory disease.