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フォリスタチンのラジオイムノアッセイの開発とその臨床応用

卵泡抑素放射免疫分析方法的建立及其临床应用

基本信息

批准号：
05770769
负责人：
新谷保実
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

雄家兎をrh-follistatin(50mug/rabbit)とFreund's adjuvantの混合物を用いて免疫し、抗follistatinポリクローナル抗体を作製した。抗体価の検定はELISAで行った。当初、このポリクローナル抗体を用いて、競合法によるラジオイムノアッセイの開発を試みたが、免疫活性を保持した^<125>I標識follistatinの作製が困難であったため、同時期に作製した抗follistatinマウスモノクローナル抗体と組み合わせたイムノラジオメトリックアッセイ(IRMA)を開発した。IRMAの操作方法は、抗follistatinマウスモノクローナル抗体(4-6D9)を固相化したスターチューブをブロッキングした後、標準品またはサンプルに抗follistatinウサギポリクローナル抗体を加え、さらに^<125>I-抗ウサギIgGヤギ抗体を加えてインキュベートし、洗浄後、チューブの放射活性を測定した。基礎的検討の結果、follistatinのIRMAは0.05-25ng/mlの範囲で良好な用量反応性を示し、アッセイの変動係数は10%以下で、アクチビン・インヒビンとの交差率は0.1%以下であった。各種生体試料の測定では、ブタ卵胞液、ヒト羊水およびヒト血清の希釈曲線は標準曲線に平行し、ブタ卵胞液中には5.6mug/mlと高いfollistatin免疫活性が認められた。正常成人の血清follistatin免疫活性は13.5±4.6ng/ml(mean±SD,n=60)で、男女ともに加歳とともにむしろ増加する傾向が認められた。Follistatinの詳細な組織濃度や卵胞液・血清中での存在様式については現在さらに検討中である。

The mixture of rh-follistatin (50mug/rabbit) and Freund's adjuvant in Xiongjia was immunized with anti-follistatin antibody. The antibody was determined by ELISA. At the beginning, the use of anti-follistatin antibodies, the use of anti-DNA antibodies, and the use of anti-DNA antibodies in the same period. IRMA method of operation, anti-follistatin antibody, anti-follistatin antibody (4-6D9), solid phase antibody, anti-follistatin antibody, anti-DNA antibody, antibody, I-anti-IgG antibodies were added to the antiserum. After washing, the radioactivity was measured by radioactivity assay. The results of the benchmark, the follistatin IRMA range of 0. 05-25ng/ml, the response indicator of good consumption, the number of activities of less than 10%, the rate of error of less than 0.1%, and the error rate of less than 0.1%. All kinds of raw materials were used to determine the immune activity of 5.6mug/ml in egg cytosol, amniotic fluid, amniotic fluid, serum. the standard curve was parallel, and the immune activity of follistatin in oocyte fluid was high. The immune activity of serum follistatin in normal adults was 13.5 ±4.6ng/ml (±SD, n = 60), and that of men and women. There is a pattern in the serum of oocytic fluid in the tissue of Follistatin. Now it is in the serum.