新規アクチビンβサブユニット遺伝子の機能解析

新型激活素β亚基基因的功能分析

• 批准号: 13760212
• 负责人: 橋本 統
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760212/
• 关键词: アクチビンC; アクチビンE; トランスジェニックマウス; リコンビナント蛋白質; 膵外分泌組織; アクチビン; インヒビン; フォリスタチン; cDNAクローニング

TGF-βsuperfamilyに属するアクチビンの構造は2種類のβサブユニット(βA、βB)同士のダイマーであり、その組合せによりアクチビンA(βAβA)、AB(βAβB)、B(βBβB)の3種類のアクチビンが存在する。近年、哺乳類において新規アクチビンβサブユニット、βCおよびβEがクローニングされ、これらはアクチビンC(βCβC)やE(βEβE)として存在する可能性が示されているが、その機能は不明である。そこで、アクチビンβCおよびβEサブユニット(ActβCおよびActβE)の機能解明を目的とし、リコンビナント蛋白質の作製および昨年度までに作製したトランスジェニック(Tg)マウスの解析を行った。リコンビナントヒトアクチビンCおよびEの作製はCHO細胞(dhfr欠損株)を用いて行った。SV40プロモーター制御下のアクチビンCまたはE cDNAとdhfr遺伝子を含む導入遺伝子をCHO細胞にトランスフェクションし、メトトレキセートでこれら遺伝子の増幅を行った。培養上清中からのリコンビナント蛋白質の存在をそれぞれの抗体で確認したが、この精製方法は現在検討中である。肝臓特異的にActβCを発現させた(アルブミンプロモーター制御下)Tgマウスに肝切除を施し、肝再生におよぼすActβCの影響を検討したところ、Tgマウスの肝細胞のDNA合成能はコントロールマウスとの間に明確な差は認められなかった。今後このTgマウスを用いて糖代謝におよぼす影響を検討する予定である。CMVプロモーター制御下でActβEを発現させたTgマウスの解析において、膵臓重量の減少が確認された。これらの組織学的解析像では、膵外分泌組織が脂肪組織に置き換わっている像が観察された。このことから、アクチビンEは膵外分泌組織の発生や機能に対して何らかの影響を及ぼしていることが示唆された。

TGF - beta superfamily に genus す る ア ク チ ビ ン の tectonic は 2 kinds の beta サ ブ ユ ニ ッ ト (beta, beta, B) with James の ダ イ マ ー で あ り, そ の combination せ に よ り ア ク チ ビ ン A (beta A beta A), AB (beta A beta, B) and B (beta beta B B) の 3 kinds の ア ク チ ビ ン が exist す る. In recent years, mammals に お い て new rules ア ク チ ビ ン beta サ ブ ユ ニ ッ ト, beta C お よ び beta E が ク ロ ー ニ ン グ さ れ, こ れ ら は ア ク チ ビ ン C C beta C (beta) や E (beta E beta E) と し て exist す が る possibility in さ れ て い る が, そ の function は unknown で あ る. そ こ で, ア ク チ ビ ン beta C お よ び beta E サ ブ ユ ニ ッ ト (Act beta C お よ び Act beta E) の function interpret を purpose と し, リ コ ン ビ ナ ン ト protein の cropping お よ び yesterday annual ま で に cropping し た ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク (Tg) マ ウ ス の parsing line を っ た. Youdaoplaceholder0, ビナ, トヒトア, トヒトア, チビ, および, C, および, E are used to prepare <s:1> CHO cells (DHFR-deficient strain)を in て て rows った. SV40 プ ロ モ ー タ ー under the system of imperial の ア ク チ ビ ン C ま た は E cDNA と DHFR posthumous son 伝 を containing む import legacy 伝 son を CHO cells に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し, メ ト ト レ キ セ ー ト で こ れ ら heritage 伝 son の raised painting line を っ た. In the culture supernatant か ら の リ コ ン ビ ナ ン ト protein の is を そ れ ぞ れ の antibody で confirm し た が, こ の refining method は 検 now please で あ る. A routine liver specific に Act beta C を 発 now さ せ た (ア ル ブ ミ ン プ ロ モ ー タ ー suppression) Tg マ ウ ス を shi し に liver resection, liver regeneration に お よ ぼ す Act beta C の influence を beg し 検 た と こ ろ, Tg マ ウ ス の の liver cells DNA synthesis can は コ ン ト ロ ー ル マ ウ ス と の に な clear difference between は recognize め ら れ な か っ た. In the future, <s:1> <s:1> Tg ウスを ウスを will be determined by using the influence of <s:1> て sugar metabolism におよぼす on を検 to discuss する. CMV プ ロ モ ー タ ー で Act under the system of imperial beta E を 発 now さ せ た Tg マ ウ ス の parsing に お い て, の Cui viscera weight reducing が confirmation さ れ た. こ れ ら の histologic analysis like で は, Cui exocrine が adipose tissue に buy き in わ っ て い る like が 観 examine さ れ た. こ の こ と か ら, ア ク チ ビ ン E は Cui exocrine organization の 発 raw や function に し seaborne て what ら か の influence を and ぼ し て い る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Hashimoto O., Tsuchida, K., Ushiro Y., Hosoi Y., Hoshi N., Sugino H., Hasegawa Y.: "cDNA cloning and expression of human activin βE subunit"Molecular Cellular Endocrinology. 194. 117-122 (2002)

Hashimoto O.，Tsuchida，K.，Ushiro Y.，Hosoi Y.，Hoshi N.，Sugino H.，Hasekawa Y.：“人激活素βE亚基的cDNA克隆和表达”分子细胞内分泌学194。117-122（ 2002）