マウス着床前胚におけるTrophoblast protein-1の遺伝子発現動態

着床現象の過程で、着床前後胚より種々の興味深い生化学的シグナルが子宮内膜に送られることが知られている。今回我々は、その蛋白性の因子に着目し下記に示す一連の研究を施行した。1 7〜9週齢のICR系雌マウスをPMSとHCGにより過排卵処理し、HCG投与後24時間、36時間、50時間、70時間、80時間後に卵管或は子宮潅流により各ステージの胚を採取し、各々50個の卵よりAGPC法を用いてRNAを抽出した。carrierとしてエタチンメイト(日本ジーン)を加えた。Trophoblast protein 1(TP-1)は、Interferon alpha遺伝子群に属する遺伝子である。同遺伝子群に保存された領域よりprimer pairを作成し、blastcystより調整したmRNAを用いてRT-PCR法を施行したところ予想されるサイズの増幅産物を得た。この増幅産物をpCRII plasmid vectorに組み込み塩基配列を決定した。(塩基配列のdataに関しましては、さらなる確認が必要ですので今回は省略させていただきます。)2 上記plasmidより、cRNAプロ-べを調整しRNase protection assayにより定量を試みたが少量すぎたため失敗に終った。そこで上記配列より特異的primer pairを作成しRT-PCR法により各ステージにおいて半定量を行った。増幅産物を見る限りにおいては、interferon alpha様遺伝子発現は桑実胚より確認された。同時に、house keeping geneであるG3PDHのRT-PCRも施行したが統べてのステージにおいてその増幅産物が確認された。3 遺伝子発現部位の組織学的検索に関しては、現在進行中である。

着床現象の過程で、着床前後胚より種々の興味深い生化学的シグナルが子宮内膜に送られることが知られている。今回我々は、その蛋白性の因子に着目し下記に示す一連の研究を施行した。1 7〜9週齢のICR系雌マウスをPMSとHCGにより過排卵処理し、HCG投与後24時間、36時間、50時間、70時間、80時間後に卵管或は子宮潅流により各ステージの胚を採取し、各々50個の卵よりAGPC法を用いてRNAを抽出した。carrierとしてエタチンメイト(日本ジーン)を加えた。Trophoblast protein 1(TP-1)は、Interferon alpha遺伝子群に属する遺伝子である。同遺伝子群に保存された領域よりprimer pairを作成し、blastcystより調整したmRNAを用いてRT-PCR法を施行したところ予想されるサイズの増幅産物を得た。この増幅産物をpCRII plasmid vectorに組み込み塩基配列を決定した。(塩基配列のdataに関しましては、さらなる確認が必要ですので今回は省略させていただきます。)2 上記plasmidより、cRNAプロ-べを調整しRNase protection assayにより定量を試みたが少量すぎたため失敗に終った。そこで上記配列より特異的primer pairを作成しRT-PCR法により各ステージにおいて半定量を行った。増幅産物を見る限りにおいては、interferon alpha様遺伝子発現は桑実胚より確認された。同時に、house keeping geneであるG3PDHのRT-PCRも施行したが統べてのステージにおいてその増幅産物が確認された。3 遺伝子発現部位の組織学的検索に関しては、現在進行中である。