ヒト唾液腺におけるサイトメガロウイルス感染性に関する研究

人唾液腺巨细胞病毒感染性的研究

基本信息

批准号：
05771556
负责人：
伊藤千鶴
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771556/
关键词：
サイメガロウイルス唾液腺末梢血単核球 PCR法免疫組織化学

项目摘要

本研究はPCR(Polymerase Chain Reaction)法の応用により、潜伏状態にあるサイトメガロウイルス(CMV)遺伝子の検出を実現するとともに、その検出方法を用いてCMV潜伏の標的細胞を明らかにした。増幅領域として、CMV株間で比較的変異が少なく、ヒトゲノムあるいは他のヘルペスウイルスと相補性の低いCMV AD169株におけるHindIII断片のb、E、J(それぞれ65K phosphoprotein/pp65、immediate early protein/IE、150K phosphoprotein/pp150を発現)を選択した。各領域において広領域を増幅するプライマーペア-を用いたPrimaryPCR法による増幅産物を鋳型として、その内側に設けたプライマーペア-でNestedPCR法を行った。大半はPrimaryPCR法では陰性であったが、NestedPCR法により陽性所見が出現した検体がみられた。しかし、同一検体でも3領域すべてで同時に陽性あるいは陰性の結果は得られなかったが、このようなPCR産物に対してはDNAシークエンサーを用いた塩基配列の決定を行い、1領域でのみ検出された産物も明らかにCMV遺伝子であることを確認した。その結果、陽性率は唾液腺で28.0%、末梢血単核球で85.2%となり、CMVは他臓器と比較すれば唾液腺に臓器特異性は高いが、末梢血単核球が潜伏の標的細胞であることが証明された。また、CMV特異蛋白の免疫組織学的検索を追加した。以上のことにより、宿主が免疫不全に陥っていない唾液腺では、容易にはCMV特異蛋白の発現は起こらないが、潜伏状態にあるCMV遺伝子は唾液腺に存在しやすい傾向があることが判明し、CMVのレセプターと唾液腺組織との特異的な相互作用が推定され、その解明が今後の課題である。

这项研究通过应用PCR（聚合酶链反应）实现了潜在状态下巨细胞病毒（CMV）基因的检测，并使用这种检测方法来阐明靶细胞潜在的CMV。作为CMV AD169菌株中印度片段的B，E和J的扩增区域，它们在CMV菌株之间的突变相对较少，并且与人类基因组或其他疱疹病毒的互补较少（表达65K磷酸蛋白/PP65，直接的早期蛋白质/IE EE/IE EE/IE EE/IE EE和150K Phoptospion/pp1）。使用初级PCR使用放大产物使用底漆对进行嵌套PCR方法，该底漆对将每个区域的较大区域作为模板放大，并在模具内提供底漆对。尽管大多数用主要PCR方法为阴性，但嵌套PCR方法出现了阳性发现的样品。但是，尽管在同一标本中同时在所有三个区域中均未获得阳性或负结果，但使用此类PCR产物的DNA序列确定碱基序列，并且可以证实，仅在一个区域中检测到的产物也显然也是CMV基因。结果，唾液腺的正率为28.0％，外周血单核细胞为85.2％。尽管与其他器官相比，CMV是高度特异性的唾液腺，但事实证明，外周血单核细胞是潜在的靶细胞。此外，还增加了对CMV特异性蛋白的免疫组织学搜索。由于上述结果，已经发现CMV特异性蛋白不容易发生在宿主不是免疫缺陷的唾液腺中，但是潜在的CMV基因倾向于在唾液腺中更有可能存在于唾液腺中，并且在CMV受体和溶性腺体组织之间的特定相互作用估计了这一未来的挑战，并且是估计的。