ヒト芳香族L-アミノ酸脱炭酸酵素の組織特異的発現の調節機構の解析

人芳香族L-氨基酸脱羧酶组织特异性表达调控机制分析

• 批准号: 05780587
• 负责人: 一瀬 千穂
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780587/
• 关键词: 芳香族L-アミノ酸脱炭酸酵素; オールタナティブプロモーター; トランスジェニックマウス; 組織特異的発現; クロラムフェニコールアセチントランスフェラーゼ

芳香族L-アミノ酸脱炭酸酵素(AADC)は、カテコールアミンニューロンやセロトニンニューロンにおいて、前駆体アミノ酸を脱炭酸してアミンを産生する反応を触媒する酵素である。AADCは神経系以外にも肝臓・腎臓などの非神経組織で高い活性が存在する。これまでに我々は神経型のAADCのmRNAと非神経型のmRNAは異なる第一エキソンを用いていることを報告した(エキソンN1およびエキソンL1)。本年度我々はヒトAADCの遺伝子より、エキソンN1から5'上流7.0kbまで、エキソンN1から5'上流3.6kbまで、エキソンL1から5'上流2.8kbまでの各フラグメントを切り出し、ウサギのbeta-グロビンイントロンを介してクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)遺伝子に接続した三種類のDNA(ACA、ACN、ACL)を用いてトランスジェニックマウス(Tg)を作成した。ACAのTgでは膵臓、肝臓、腎臓、小腸、大腸できわめて高いCAT活性を発現した。これらの組織はAADC活性の分布と一致し、また免疫組織化学の方法により、肝細胞および副腎髄質細胞にCATの免疫活性とAADCの免疫活性が一致して存在することを確認した。しかし、中枢神経系においてはCATの免疫活性の分布はカテコールアミンニューロンおよびセロトニンニューロンと一致しなかった。ACNのTgでは、多くの組織でCAT活性を発現したが、その強さはACAに比較して弱いものであり、特に肺と肝臓では殆ど活性を発現しなかった。ACLのTgでは腎臓に中程度のCAT活性を発現した。これらの結果から以下の結論が導かれる。1、ヒトAADC遺伝子のエキソンN1から3.6kb上流まで、およびエキソンL1から2.8kb上流までのフラグメントは単独で十分強くレポーター遺伝子を発現することはできず、組織特異的な発現も見られない。2、エキソンN1から7.0kb上流までフラグメントは末梢の非神経組織にAADC活性の分布に一致して十分な活性を発現し得るので、これらの組織に対するシスエレメントの大部分を含んでいる可能性が高い。3、中枢神経系においてカテコールアミンニューロンおよびセロトニンニューロン特異的にAADCの発現を調節する領域はさらに5'上流もしくは5'上流域以外の部位に存在することが推定される。これらの結果に基き培養細胞を用いてさらに詳細なシスエレメントの解析と、特に神経特異的な発現を規定する領域を検索する予定である。

Aromatic L-Aminic acid decarbonation enzyme (AADC), カテコールアミンニューロンやセロトニンニThe ューロンにおいて, the former アミノ acid を decarbonation してアミンを generates the するreaction をcatalyst するenzyme である. AADC has high activity in non-organic tissues other than the liver and kidneys.これまでに我々は神経TypeのAADCのmRNAと不神経TypeのmRNAはdifferentなる号一エキソンを用いていることをreport した(エキソンN1およびエキソンL1). This year I'm a 々はヒトAADCの伝子より、エキソンN1から5' upstream 7.0kbまで、エキソンN1から5' Upstream 3.6kbまで、エキソンL1から5'Upstream 2.8kbまでのeachフラグメントをcutり出し、ウサギのbe ta-グロビンイントロンを开してクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)伝子に Pick up The three types of DNA (ACA, ACN, ACL) are made from the same DNA as Tg. ACA's Tg has high CAT activity in the intestines, liver, kidneys, small intestine, and large intestine. The uniform distribution of AADC activity in tissues, the method of immunohistochemistry, and the hepatocytes The immunological activity of CAT in the accessory renal epithelial cells and the immunological activity of AADC are consistent and the presence is confirmed.しかし、central nervous system においてはCATのimmune activity のdistribution はカテコールアミンニューロンおよびセロトニンニューロンと同しなかった. ACNのTgでは、多くの体でCATACTIVEを発appearしたが、その强さはAC A is a relatively weak one, and a special one is the active one. The ACL's Tg and the kidneys show a moderate level of CAT activity. The result is the conclusion below. 1. およびエキソンL1 から2.8kb high-flow versionのフラグメントは単多で Very strong くレポーター伝子を発The appearance of the appearance is the tissue-specific appearance of the appearance of the appearance. 2. The distribution of AADC activity in the non-neural tissue of the upstream 7.0kb high-speed human body is consistent. There is a very high possibility that the active and active parts of the organization will be the same. 3. The special AADC of the central divine system, the special AADCの発appears to adjust the area of ​​the area はさらに5'The upper stream もしくは 5'The area outside the upper basin exists and the することが is presumed to be される.これらのRESULTSにbaseきCultured cellsを UseいてさらにDetailsなシスエレメントのAnalyze and analyze the specific rules and regulations of the special gods and the specific fields.

项目成果

Takahide Nomura: "Cioning and sequencing of cDNA encoding mouse GTP cyclohydrolase I" Biochem.Biophys.Res.Commun.191. 523-527 (1993)

Takahide Nomura：“编码小鼠 GTP 环水解酶 I 的 cDNA 的连接和测序”Biochem.Biophys.Res.Commun.191。