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がん遺伝子mycの神経細胞分化への関与の解析

癌基因myc参与神经元分化的分析

基本信息

批准号：
05780607
负责人：
堀越哲郎
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、がん遺伝子そして最初期遺伝子の一種であるmyc遺伝子が神経細胞の分化にどう関与しているのかを調べる目的で、発生中のラット小脳を用いて神経細胞の発生・分化時のmyc遺伝子発現を調べ以下の結果を得た。1.非ラジオアイソトープ的にラベルしたRNAプローブでc-mycおよびN-myc mRNAのinsitu hybridizationが可能になった。2.c-mycおよびN-mycの発現時期、発現している細胞の種類を比較したが、両者に発現パターンの差は見られなかった。なお、プローブは各々のmRNAの特異的領域に対するものであり、競合実験によっても互いに干渉しないことを確かめている。3.myc遺伝子の発現は神経細胞が分化して移動したりシナプスを形成していると考えられる時期に強いことがわかった。これを免疫組織化学的及び生化学的に測定したPI代謝回転とを比較してみると、生後15日までの発生段階ではmyc遺伝子が多く発現している細胞でPI代謝回転も活発であると考えられる結果が得られた。これは神経細胞の分化の際にPI代謝回転によりmyc遺伝子の発現が制御されているという可能性を示唆しているものと考えられる。ただし成熟ラット小脳で見られたプルキンエ細胞の一部に抗PIP_2染色が強く出ることとmyc発現パターンが一致しないなどの点もあり、PI代謝回転とmyc発現が単純に対応しているとは考えにくく、今後さらに研究が必要である。4.当初の計画ではPCR法を利用して細胞レベルでmyc発現量を測定する予定であったが、これはラジオアイソトープ使用の制限等から、現在のところ可能になっていない。しかし、銀染色により高感度なPCR産物の検出が可能になってきたので、今後はデンシトメトリーと組み合わせることにより定量化が可能になるものと思われる。

This study aims to investigate the role of myc gene in the development and differentiation of neurocytes. 1. The insitu hybridization of c-myc and N-myc mRNA may be involved in the development of non-coding RNA. 2. The development period of c-myc and N-myc, the types of cells developed during the development period, and the differences between the development period and the development period of c-myc. The mRNA of each of the three genes is expressed in a specific domain, and the mRNA is expressed in a specific domain. 3. The development of myc gene is related to the differentiation and migration of neurons. The results of immunohistochemical and biochemical assays of PI metabolism were compared with those of myc gene expression at the 15th day of life. This is the case with PI metabolism during neuronal differentiation, and the possibility of myc gene production is discussed. Some of the cells were resistant to PIP_2 staining, and some of the myc cells were resistant to PIP_2 staining. The myc cells were resistant to PIP_2 staining, and some of the myc cells were resistant to PIP_2 staining. 4. The original plan was to use PCR to determine the amount of myc produced by the cell. The detection of highly sensitive PCR products by silver staining is possible, and the quantification is possible.