両生類下垂体ホルモンのプロセシング酵素に関する研究

两栖类垂体激素加工酶的研究

• 批准号: 05740500
• 负责人: 岩室 祥一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05740500/
• 关键词: プロセシング; アミド化酵素; プロオピオメラノコルチン(POMC); 無細胞タンパク合成系

両生類下垂体ホルモンのプロセシングについて、ウシガエル下垂体を材料に、以下の2項目を中心に研究を行った。即ち、(1)ペプチドのC末端をアミド化する酵素の遺伝子のクローニング、(2)多機能型前駆体タンパクであるプロオピオメラノコルチン(POMC)遺伝子のクローニング、である。(1)について、ツメガエルの皮膚に存在するアミド化酵素の遺伝子の塩基配列をもとにプライマーを合成し、精製したツメガエル皮膚のmRNAに対するcDNAを鋳型に、PCR法を用いてツメガエルアミド化酵素をコードする遺伝子の一部分を増幅し、プローブとした。ウシガエル下垂体中・後葉から作製したcDNAライブラリーについてアミド化酵素遺伝子のスクリーニングを行ったところ、ポジティブクローン1個を得た。現在、さらにスクリーニングを続けている。(2)について、ウシガエル下垂体中・後葉のmRNAをコムギ胚芽抽出液を用いた無細胞タンパク合成系で翻訳し、合成されたタンパクをPOMC関連ペプチドに対する抗血清により免疫沈降させたところ、SDS電気泳動上で分子量の異なる2本のバンドが検出された。ウシガエルPOMC遺伝子が複数存在するかどうかを明らかにするため、前述の下垂体中・後葉のcDNAライブラリーと、合成プライマーおよびPCR法により作製したPOMCのプローブを用いて、POMCのcDNAのクローニングを試みた。その結果、コムギ胚芽抽出液により合成されたPOMC前駆体タンパクのうち一方はア-ティファクトであることがわかった。現在、POMCcDNAの8割程度の塩基配列が決まっている

The following two projects are being carried out in the center of research on the development and application of biological pendants. That is,(1) selection of the C-terminal end of the enzyme gene,(2) multifunctional precursor gene,(POMC) gene. (1)The gene sequence of the enzyme in the skin is synthesized, purified and typed by PCR. The gene sequence of the enzyme in the skin is amplified and some of the genes in the enzyme are amplified. A cDNA sequence was obtained from the posterior lobe of the pituitary gland. Now, in the middle of the day, you're going to have to go to the bathroom. (2)The mRNA of the posterior lobe of the pituitary gland was detected in the embryo extract, and the cell-free synthesis system was used. The synthesis system was used in the POMC related selection system. The antiserum was used in the immunosedimentation and SDS electrophoresis. The molecular weight of the two samples was different. POMC gene expression is complex, and the cDNA expression of the posterior lobe of the pituitary gland is complex, and the cDNA expression of the posterior lobe of the pituitary gland is complex. As a result, the embryo extract was synthesized from POMC precursor. Now, POMC cDNA 8-cut level of gene alignment determination

项目成果

S.Iwamuro: "Secretion of Immunoreactive Joining Peptide by the Pituitary of the BullfrogRana catesbeiana" The Annals of the New York Academy of sciences. 680. 552-554 (1993)

S.Iwamuro：“牛蛙脑垂体分泌免疫反应性连接肽”纽约科学院年鉴。

S.Iwamuro: "Cell-free translation products containing N-terminal Proopiomelanocortin encoded by messenger RNA from bullfrog pituitary gland" Zoological Scionce. 10. 132 (1993)

S.Iwamuro：“含有牛蛙垂体信使 RNA 编码的 N 末端阿黑皮素原的无细胞翻译产物”Zoological Scionce。

S.Iwamuro: "An additional arginine-vasotocin-related peptide,vasotocinyl-Gly-Lys,in Xenopus neurohypopysis" Biochimica et Biophysica Acta. 1176. 143-147 (1993)

S.Iwamuro：“非洲爪蟾神经垂体中的一种额外的精氨酸-加压素相关肽，加压素-甘氨酸-赖氨酸”《生物化学与生物物理学学报》。