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C末端アミド化酵素がミエリンペプチドアミドの生合成に関与している可能性について

关于C端酰胺化酶参与髓磷脂肽酰胺生物合成的可能性

基本信息

批准号：
10877023
负责人：
野口正人
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

生体内のほとんどのアミド化ペプチドは、peptidylglycine α-amidating monooxygenase(PAM)によって生成される。ところが、これとは異なる機構によるC端アミド化ペプチドが脳内に存在することが、近年Tatemotoらによって発見され、それぞれMPA-12,-14,-16と命名された。これらの生成機構には、その前駆体であるミエリン塩基性タンパクの構造から、3つの可能性が考えられる。すなわち、1)C端Tyr、AlaへのNH_2OH,NH_3を供与体とした付加反応またはアミノ転移反応、2)C端Leuの酸化的脱アルキル化(生理活性アミド化ペプチド生成と類似反応)、3)C端Tyr、AlaにGlyが付加後、PAMによってアミド化される(グリシンN-アシル転移酵素を介する脂肪酸アミド生成と類似反応)機構である。そこで、MPA-14前駆体アナログとして_<D->YKY,_<D->YKYL,_<D->YSKYLを合成し、これらをアミド化する酵素活性が、ラット脳に存在するかどうかを検討した。それぞれの反応機構を考慮し、1)NH_2OH,NH_3,Asp,Gluなどの基質とピリドキサルリン酸,FAD,NADH,ATPなどの補酵素を添加した系、2)アスコルビン酸,NADH,FADH_2,グルタチオン,還元型プテリン,Cu^<2+>などのcofactor、もしくはNAD^+,NADP^+,FAD,FMNなどの酸化型補酵素を添加した系、3)GlyとCoAを添加した系に関して、ラット脳ホモジェネートおよび脳ミクロゾーム画分に関し、アミド化酵素活性の有無を系統的にスクリーニングした。その結果、どの系においても期待されるアミド化ペプチドの生成を認めなかった。以上の結果から、今後の検索のためには、前駆体アナログとすべき合成基質の種類をさらに検討し、用いるべき酵素標品の部分精製にも検討を加えていかなければならない。

In vivo, peptidylglycine α-amidingmonooxygenase (PAM) is produced. In recent years, Tatemoto has been named MPA-12,-14,-16. The mechanism of formation of this kind of structure is the precursor of this kind of structure, and the possibility of this kind of structure is also examined. The mechanism of fatty acid production by C-terminal Tyr, Ala, Gly and PAM is described as follows: (1) C-terminal Tyr, Ala and NH_2OH, NH_3 are supplied to the system and the enzyme is added to the system;(2) C-terminal Leu is acidified and deregulated;(3) C-terminal Tyr, Ala and Gly are added to the system and PAM is deregulated. The enzyme activity of MPA-14 <D-><D->precursor is discussed<D->. 1) NH_2OH, NH_3, Asp, Glu, NH_2OH, NH_3, Asp, Glu, NH_2OH, NH_2OH, NH_3, Asp, Glu, NH_2OH, NH_2OH The activity of enzyme is related to the activity of enzyme and the activity of enzyme is related to the activity of enzyme. The results and results of the system are expected to be generated in the future. The above results show that in the future, there will be a study on the type of precursor and synthetic substrate, and a study on the partial purification of enzyme standard with Chinese medicine.