膜在性酵素の固定化担体の開発とその利用

膜酶固定化载体的研制及其应用

• 批准号: 05750706
• 负责人: 後藤 猛
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05750706/
• 关键词: 膜在性酵素; リポソーム; 固定化酵素; gamma-グルタミルトランスペプチダーゼ

生体膜に存在する酵素(膜在性酵素)はその機能発現と安定化にリン脂質またはリン脂質二分子膜の反応場を必要とするなどの特徴を有するため,この酵素機能を利用するための有効な固定化技術は無かった。著者は,ゲルビーズ内に封入したリン脂質二分子膜閉鎖小胞体(リポソーム)が膜在性酵素の固定化担体として有効と考え,Wallstenらの方法を応用したコール酸透析除去法によって牛腎臓gamma-グルタミルトランスペプチダーゼをリポソームに再構成するとともにこのリポソームをゲル内に封入固定化する事を試み,タンパク質とリン脂質の固定化量および酵素反応性を観点として固定化条件を検討した。その結果,透析緩衝液としてTris-HCl(pH7.5),支持担体ゲルとしてセファロースCL-6Bが,また,酵素-リン脂質-コール酸混合溶液のリン脂質濃度は45mg/mlが最適であることを明らかにした。なお,この際,リポソームが封入固定化されているゲルビーズと封入固定化されていないリポソームとを分離することが再現性のあるデータを得る上で重要であったが,補助金により購入した高速冷却遠心分離器は特にこの目的に使用した。さらに,本固定化方法において介在するリポソームはgamma-グルタミルトランスペプチダーゼの反応性と安定性に非常に有効であることを示した。また,ゲル充填カラムを用いたリアクター操作を行い,リポソームを介してセファロースCL-6Bに固定化したgamma-グルタミルトランスペプチダーゼは12時間に渡って安定にその触媒機能を発現出来ることを明らかにした。以上の結果より,リポソームとセファロースCL-6Bから成るこのハリブリット型担体は脂質要求性酵素または膜在性酵素の固定化に有効であることを明らかにした。

In the presence of zymozymes (membrane-active enzymes) in the biological membrane, the stabilizing enzyme (membrane-active enzyme) can be stabilized and the bilayer membrane can be stabilized. the enzyme machine can make use of the immobilization technology. The author said that the immobilized carrier of the sex enzyme was embedded in the bilayer membrane of lipids and lipids. The Wallsten method was used to remove the enzyme from the gamma- solution by acid dialysis, and then the immobilization conditions were determined by the immobilization conditions. The results showed that the dialysis solution was purified Tris-HCl (pH7.5), and the support was supported by enzyme-lipid-acid mixed solution. The highest concentration of 45mg/ml was found in the mixed solution of enzyme-lipid-acid. In order to improve the performance of the high-speed cooling heart separator, it is necessary to use the high-speed cooling heart separator. In this method of immobilization, the stability of the immobilization method is very high in this method of immobilization, which is related to the stability of the immobilization method. This immobilization method is used in this method of immobilization. This method of immobilization is used in this method. In this case, the filling system is operated by the operator, and the CL-6B is immobilized by the immobilization of the gamma-. It can be detected by the 12-hour transom tranquilizer catalyst. As a result of the above results, it is necessary to determine the effect of CL-6B on the immobilization of sexual enzymes on the membrane of sexual enzymes.

项目成果

Takeshi Gotoh: "Immobilization of gamma-glutamyl transpeptidase,a membrane enzayme,in gel beads via liposome entrapment" Journal of Fermentation and Bioengineering. 77. 269-274 (1994)

Takeshi Gotoh：“通过脂质体包埋将γ-谷氨酰转肽酶（一种膜酶）固定在凝胶珠中”《发酵与生物工程杂志》。