C型インフルエンザウイルスのイオンチャンネル蛋白の検索

寻找丙型流感病毒的离子通道蛋白

• 批准号: 05857034
• 负责人: 本郷 誠治
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857034/
• 关键词: C型インフルエンザウイルス; マトリックス蛋白質; イオンチャンネル

M遺伝子由来のunspliced mRNAからC型インフルエンザウイルスのイオンチャンネル蛋白(M2蛋白)が合成されるとの作業仮設を立て研究を進めた結果、感染細胞内にunspliced mRNAが存在することを以下のように証明した。感染細胞から精製したmRNAを鋳型とし、M1蛋白をコードするmRNAのスプライシング部位をはさむプライマーを用いたPCRにより、M遺伝子の主要な転写産物であるspliced mRNA以外にM2をコード可能なunspliced mRNAが存在することが示唆された。更にmRNAとM遺伝子(-)センスRNAプローブを用いたRibonuclease protection assayから、spliced mRNAの13%の割合でunspliced mRNAが合成されていることを証明した(第41回日本ウイルス学会、1993)。次にM2蛋白を感染細胞内に検出するために、同蛋白に特異的な抗体の作製を以下のように試みた。M2蛋白のC側の強い抗原性を持つと予測される配列のオリゴペプチド(EDAPDETDNS)を合成し、ウサギに免疫したが抗M2抗体は得られなかった。そこで予測されるM2蛋白の親水性のN側及びC側の配列、またはM2の全配列をコードするcDNAをpGEX-2Tベクターに組み込み、グルタチオンSトランスフェラーゼのC末端にM2の配列が結合した融合蛋白を大腸菌で発現させ、精製後にウサギに免疫した。融合蛋白を抗原としたウェスタンブロットで抗体価の上昇を確認できたので、今後この抗M2特異抗体を用いた蛍光抗体法、ウェスタンブロット法で感染細胞内にM2蛋白が合成されているか否かを検証する予定である。

The origin of Myidenzi unspliced mRNAからC-type protein (M2 protein) The results of the synthesis work, the design and establishment of the work, and the results of the research, unspliced in the infected cells The existence of mRNA is proven by the following procedures. Infected cells, purified mRNA, and M1 protein, mRNA and protein.をはさむプライマーをいたPCRにより、M簼伝子のMainな転WRITTEN PRODUCT であるspliced There is a possibility that unspliced mRNA may exist other than M2. Used Ribonuclease protection assay, spliced mRNA 13% cleavage and unspliced Proof of mRNA synthesis and synthesis (41st Japan Institute of Technology, 1993). The sub-M2 protein can be used to infect cells, and antibodies specific to the same protein can be produced and tested. The strong antigenicity of the C side of the M2 protein and the predicted alignment of the M2 protein (EDA PDETDNS)をsynthesis,ウサギにimmuneしたがanti-M2 antibodyはgetsられなかった. The predicted hydrophilic N-side and C-side alignment of the M2 protein, and the full alignment of the M2 M2 protein, the pGEX-2T ベクターに group,込み、グルタチオンSトランスフェラーゼのC terminal M2のarray Combined with the fusion protein, Escherichia coli appears, and the purified immune system is used. Fusion protein をantigen としたウェスタンブロットでantibody 価のrise をconfirmation できたので、In the future このanti-M2 specific antibody をいThe photoantibody method and the ウェスタンブロット method are used to determine whether M2 protein is synthesized in infected cells or not.