In situ hybridizationによる血小板活性化因子受容体の眼内分布

原位杂交法观察血小板活化因子受体的眼内分布

• 批准号: 05857185
• 负责人: 森 樹郎
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857185/
• 关键词: 血小板活性化因子; 受容体; in situ hybridization; 眼

1.血小板活性化因子受容体cDNAより約1kbのコーディング領域のみを新たなベクターにサブクローンした。このplasmidDNAよりコーディング領域とハイブリダイズするcRNAプローブを作成し、眼組織においてin situ hybridizationを行った。現在までに得られた当受容体に対する抗体は免疫組織染色に使用できないので、蛋白としての同定を組織切片で行うことはできなかった。2.結果・考察:当初、hybridizationによるシグナルは非常に弱く、通常のin situ hybridizationの検出感度を下回った。プローブの比活性を高くし、ハイブリダイズ後の洗浄の条件を最適化することによって特異的シグナルを検出することが可能になった。シグナルは網膜の神経節細胞層、内顆粒層、虹彩上皮、毛様体に認められた。より弱いシグナルが網膜外顆粒層、視細胞内節に認められた。試験的実験の結果では、発生の経過中で発現が著しく変化する段階はなかった。ハイブリダイズ後に行うニッスル染色およびヘマトキシリン・エオジン染色ではシグナルをもつ細胞の同定は困難であった。一方、脳組織において同様のin situ hybridizationを行ったところ、ニューロンだけでなく、グリア系の細胞にも当受容体mRNAが発現していることが判明した。現在、細胞マーカーを使用した染色を併用し、発現細胞の同定を目標にさらに解析を続けている。

1. Platelet activating factor receptor cDNA is about 1kb in length and is new to the domain. This plasmidDNA sequence is responsible for the synthesis of cRNA in situ hybridization. Now, when the receptor antibody is used, the protein is used in the same tissue section. 2. Results: Initial, hybridization, and detection sensitivity are very weak, usually in situ hybridization. The specific activity is high, and the washing conditions are optimized. The retinal ganglion cell layer, inner granular layer, iridescent epithelium and trichomes were identified. The outer granular layer of retina and the inner segment of optic cell are recognized by the weak group. The result of the trial is that the stage of development appears in the middle of the process. It is difficult for cells to be identified. The expression of receptor mRNA in a cell line was identified when the mRNA of the receptor was expressed in the cell line. Now, cells are used for staining, and cells are identified for analysis.