Energetik der spontanen Membranproteininsertion bei Eubakterien

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Anhand von bakteriellen Modellproteinen sollen die energetischen Grundlagen der spontanen Translokation von Proteinen in die Cytoplasmamembran von Escherichia coli untersucht werden. Im Vordergrund stehen dabei Untersuchungen an Liposomen. Die Lipidzusammensetzung soll insbesondere im Hinblick auf die Oberflächenladung der Liposomen, aber auch in bezug auf die Fettsäurereste bzw. die Fluidität der jeweiligen Lipiddoppelschicht variiert werden. Ein Membranpotential über die Liposomen soll mit Na+, K+ und Valinomycin eingestellt werden und wird über Fluoreszenzquenching mit Oxonol VI überprüft und quantifiziert. Ziel dieser Untersuchungen ist es, quantitative Angaben über den Energiebedarf zur (spontanten) Translokation von Proteinen machen zu können. Das einspännige Pf3 Protein und das zweispännige M13 Procoat Protein werden an spezifischen Stellen mit Fluoreszenzfarbstoffen markiert. Die gereinigten Proteine werden dann in den Liposomenexperimenten eingesetzt und sollen eine einfache Quantifizierung der Effizienz der erfolgten Translokation ermöglichen.