ヒト由来肝癌培養細胞によるTSP(Thrombo spondin)の発現様式

培养的人肝癌细胞 TSP（Thrombo spondin）的表达模式

• 批准号: 06770944
• 负责人: 内田 信治
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770944/
• 关键词: 肝癌培養細胞; トロンボスポンジン; 発現; 免疫生化学

トロンボスポンジン(TSP)は、癌転移に関与するとされる。主として血小板由来の糖蛋白で、細胞接着能、凝固促進能、細胞遊走能等を有しており、特に乳腺癌、偏平上皮癌等に多量に分泌されることが報告されている。しかし原発性肝癌に関するTSPの研究の報告はまだみられない。そこで我々は、肝癌細胞におけるTSPの発現状態および性状を検討する目的で、ヒト肝癌培養細胞株(KIM-1)を用いて免疫生化学的に検討した。2×10^4個のK1M-1細胞を、スライドガラス上で無血清下に3日間培養し、抗TSP抗体を用いて、免疫化学染色法(ABC法)、免疫蛍光染色法、共焦点レーザー走査顕微鏡解析法によりTSPの発現状態を検討した。さらにTCAによる濃縮培養上清と培養細胞ホモジネート液、またコントロールとしてヒト血小板由来TSPを用いてWesterc blotting法を行い、各々におけるTSPの有無を比較検討した。その結果、ABC法、免疫蛍光染色法では、すべての細胞においてTSP染色は陽性であった。また、共焦点レーザー走査顕微鏡解析では、核周囲の細胞質に顕粒状にTSPの発現を認めた。Wes-tern blotting法では、培養細胞ホモジネート液でヒト血小板由来TSPと同様にMW150,000のTSPを確認したが、培養上清とその濃度液中には認めなかった。これらの結果よりKIM-1細胞はTSP産生細胞であることが示され、その細胞内局在は核周囲の細胞質であることが強く示唆された。そして、KIM-1細胞内のTSPはヒト血小板由来TSPと同様の物質であると考えられた。

据说血小板传播（TSP）与癌症转移有关。它是一种主要来自血小板的糖蛋白，具有细胞粘附，突发性和细胞迁移，据报道，在乳腺癌和扁平细胞癌中被大量分泌。但是，尚未发现有关原发性肝癌的TSP研究的报道。因此，我们研究了TSP在肝癌细胞中的表达状态和特性，并使用人肝癌培养细胞系（KIM-1）进行免疫化学化学化学。将2×10^4 K1M-1细胞在无血清的载玻片上培养3天，并通过免疫化学染色（ABC），免疫荧光染色和共聚焦激光扫描显微镜分析检查TSP的表达状态。此外，使用TCA，培养细胞的匀浆溶液和人血小板衍生的TSP作为对照进行WestERC印迹，并比较每种TSP，并进行了研究，并进行了研究。结果，使用ABC和免疫荧光染色的所有细胞中TSP染色均为阳性。此外，共聚焦激光扫描显微镜分析显示细胞质周围细胞质中TSP的颗粒表达。在WES-TERN印迹法中，在培养的细胞匀浆溶液中证实了MW 150,000的TSP，类似于人血小板衍生的TSP，但在培养上清液或其浓度溶液中却没有。这些结果表明，KIM-1细胞是产生TSP的细胞，强烈建议它们的亚细胞定位在核周细胞质中。此外，KIM-1细胞中的TSP被认为与源自人血小板的TSP相似。