卵母細胞受容体発現モデルを用いたイノシトール燐酸情報伝達系に対する麻酔薬の作用

使用卵母细胞受体表达模型研究麻醉剂对磷酸肌醇信号系统的影响

• 批准号: 06771176
• 负责人: 岡村 篤
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771176/
• 关键词: NMDA; TPA; Oocyte; Anesthetic

卵母細胞による受容体の発現を得るため、ラット大脳より、mRNAキットにより1mg/mlのPoly(A)+mRNAを抽出した。アフリカツメガエル卵母細胞をcollagenase(15mg/ml)で120分処理したものにmicroinjecterを用いて50ngのPoly(A)+mRNAを注入した。mRNA注入後の卵母細胞は2日間培養した後、電気生理学的実験に用いた。麻酔薬による受容体応答の変化は2電極膜電位固定法で行った。電位固定に膜電位固定増幅器(日本光電、CEZ-1200)を用いた。記録には14bit A/D変換器(TEAC,9351)に接続したコンピュータ(HP,340CH)を用いた。ソレノイドバルブを用いた薬物急速投与法(Y-tube法)によって中枢神経系における興奮性の伝達物質であるN-methyl-D-aspartate(NMDA)を1,50,100μMの濃度で投与し、コントロールのdose-response curveを得た。次に、NMDA誘発電流を増強するprotein kinase-C(PKC)のアクチベータである12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA)を前処置するとNMDAによる誘発電流は増強され、その程度はNMDAの濃度に比例した。次に揮発性麻酔薬であるメトキシフルランを灌流液中に溶解し投与し、TPAによるNMDA誘発電流の増強がどの様に影響されるかを解析しようとしたが、十分なデータを収集できなかった。

Oocyte receptor development was achieved at 1mg/ml of Poly(A)+mRNA. Oocytes were treated with collagenase(15mg/ml) for 120 minutes and injected with 50ng of Poly(A)+mRNA. After mRNA injection, oocytes were cultured for 2 days, and electrophysiology was studied. The method of fixing the potential of the electrode membrane is used to change the response of the receptor. Potential fixed membrane potential fixed amplifier (Nippon Optoelectronics, CEZ-1200) Record 14-bit A/D converter (TEAC,9351) and connect to HP,340CH The dose-response curve of N-methyl-D-aspartate(NMDA) at concentrations of 1, 50, and 100 μM was obtained by the Y-tube method. NMDA induced current increased in proportion to the concentration of NMDA. The effect of NMDA induced current enhancement on the solubility of TPA in perfusate was analyzed.