哺乳動物卵成熟過程におけるmRNAの解析

哺乳动物卵子成熟过程中的mRNA分析

• 批准号: 06771313
• 负责人: 寺田 幸弘
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771313/
• 关键词: messenger RNA; Growth Hormone; Growth Hormone Receptor; Occyte meturation; Preimplantation Embryo

マウス卵〜着床前胚における、Growth Hormone Receptor m-RNAの発現近年、Growth Hormone(GH)の生殖医学領域への関与が注目されており、排卵刺激法の補助手段として臨床応用されつつある。最近になり、Growth Hormone Receptor(GHR)のクローニング、GHRに対する抗体(Mabs)の開発とともに、胎児や生殖器官にそれが幅広く発現していることが確認され、初期胚発育との関与が注目されている。今回我々は卵成熟から初期胚発育過程におけるmRNAの解析の端緒として、GHRmRNAの発現を観察した。方法としては、卵及び各発育段階の胚を30-50個採取し、Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction法にて着床前胚でのGHRmRNAの発現を検討した。PCRに用いたプライマーは、細胞外領域をコードするExon2からExon4にかけての領域を増幅するべく設定した。結果としては、GHRmRNAは8細胞期から発現しているのが観察された。また、タンパクレベルでの発現を見るため、卵及び各発育段階の胚を固定し、2種のGHR-Ab(Mab5,Mab263)を用いた蛍光抗体法でGHRタンパクの発現を検討した。蛍光染色した全裁標本の観察には共焦点レーザー顕微鏡(Carlzeiss)を用いた。その結果としては、Compaction後の胞胚からMab5,Mab263で認識されるGHRタンパクが発現しているのが観察された。以上の結果より、着床前胚にGHRとGHRmRNAが発現していることを免疫蛍光抗体法、RT-PCR法から初めて明らかにした。以上から、初期胚体外培養系において、GH使用が有用である可能性が考えられた。

マ ウ ス に egg ~ before implantation embryo お け る, Growth Hormone Receptor m - RNA の 発 presently in recent years, Growth Hormone (GH) の reproductive medicine へ の masato and が attention さ れ て お り, ovulation stimulation method の incentives と し て clinical 応 さ れ つ つ あ る. Recent に な り, Growth Hormone Receptor (GHR) の ク ロ ー ニ ン グ, GHR に す seaborne る antibodies (Mabs) の open 発 と と も に, where や reproductive organs に そ れ が picture hiroo く 発 now し て い る こ と が confirm さ れ, early embryo 発 と の masato and が attention さ れ て い る. Today to my 々 は eggs mature か ら early embryo 発 during に お け る mRNA の parsing の clue と し て, GHRmRNA の 発 now を 観 examine し た. Method: と て て た, 30 to 50 embryos of each developmental stage, including oocytes and び, were selected. The <s:1> and Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction methods were used to determine the にて pre-implantation embryo で <s:1> GHRmRNA <s:1> development を検 to obtain た. PCR に with い た プ ラ イ マ ー は, extracellular domain を コ ー ド す る Exon2 か ら Exon4 に か け て を raised の field amplitude す る べ く set し た. The results showed that と て て て された, and the <s:1> 8-cell phase of GHRmRNA was て ら, <s:1> て る る, and が観 が観 were observed された. ま た, タ ン パ ク レ ベ ル で の 発 を now see る た め, eggs and び 発 yukon Duan Jie の embryo を fixed し, two の GHR - Ab (Mab5, Mab263) を い た 蛍 light antibody technique で GHR タ ン パ ク の 発 を now beg し 検 た. 蛍 light staining し た all cutting specimens の 観 examine に は total focus レ ー ザ ー 顕 micro mirror (Carlzeiss) を い た. そ の results と し て は, after Compaction の cell embryo か ら Mab5, Mab263 で know さ れ る GHR タ ン パ ク が 発 now し て い る の が 観 examine さ れ た. Results above の よ り, before implantation embryo に GHR と GHRmRNA が 発 now し て い る こ と を immune antibody 蛍 light method, rt-pcr method か ら early め て Ming ら か に し た. The above ら ら, the in vitro culture of the initial embryo is にお て て, and the use of GH が is useful である. Youdaoplaceholder5 examines えられた.

项目成果

寺田幸弘他: "マウス着床前胚に対するGrowth Hormoneの働きとGrowth Hormone Receptorの発現" 哺乳動物卵子学会誌(ワークショップ抄録). 12. (1995)

Yukihiro Terada 等人：“生长激素的功能和生长激素受体在小鼠植入前胚胎上的表达”哺乳动物卵子学会杂志（研讨会摘要）12。（1995）。