アデニン関連化合物のHPLC-化学発光検出システムの開発と生体試料分析への応用

腺嘌呤相关化合物HPLC-化学发光检测系统的开发及其在生物样品分析中的应用

基本信息

批准号：
06772105
负责人：
黒田直敬
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アデニン関連化合物のHPLC-化学発光検出システムを構築するにあたり、まず、フロー系を用いて発光反応条件を検討した。アデニンとフェニルグリオキサールとの反応によって得られる化学発光誘導体の発光観測には、過酸化水素、アルカリ水溶液、ジメチルホルムアミド(DMF)等が必要である。そこで以下に述べるフローインジェクションシステムをモデルとして化学発光検出を試みた。溶液A:キャリヤ-溶液、イソプロパノール(2-PrOH);溶液B:過酸化水素及び2-メルカプトエタノール(2-ME)を含む2-PrOHとDMFの等量混液;溶液C:NaOH水溶液。これらの溶液の送液は1台のペリスタ型ポンプを用いて行った。キャリヤ-溶液中に注入(10μL)された試料は、まず溶液Bと混和され、次いで溶液Cと合流したのち化学発光検出器に導かれる。試料にはアデニンとフェニルグリオキサールの反応混液を使用した。その結果、例えば、50mM過酸化水素、5mM2-ME及び0.15MNaOHを用いてそれぞれの流速を1.8mL/minに設定した場合、約30pmol/注入量のアデニンが検出でき(S/N=3)、フロー系を用いてアデニン誘導体の化学発光検出が可能であることが判明した。今後、アデニン関連化合物の高速液体クロマトグラフィー(HPLC)による分離条件の検討、並びにポストカラム試薬による化学発光誘導体化条件の検討を行い、DNA等を含むアデニン化合物の一斉高感度分析法の開発を行う予定である。また、本誘導体化反応による化学発光誘導体を単離し、その構造・性質を明かにすることは、化学発光試薬を開発するうえで非常に重要であるため、これについても検討を行っていく予定である。

当构建与腺嘌呤相关化合物的HPLC化学发光检测系统时，首先使用流动系统检查发光反应条件。为了观察通过腺嘌呤和苯胺和苯基乙二醇，过氧化氢，碱性碱性溶液，二甲基甲酰胺（DMF）等获得的化学发光衍生物的发光。因此，我们尝试使用下面描述为模型的流动注入系统来检测化学发光。溶液A：载体溶液，异丙醇（2-ProH）；溶液B：含有过氧化氢和2-甲醇（2-Me）的2-ProH和DMF的相等混合物；溶液C：NaOH水溶液。这些溶液是使用单个蠕动型泵喂养的。首先将注入的样品（10μL）与溶液B混合，然后与溶液C汇合，然后将其定向到化学发光检测器。样品是腺嘌呤和苯基乙醛的反应混合物。结果，发现例如，当将50 mm的过氧化含量，5 mm 2-Me和0.15 m NaOH设置为1.8 ml/min时，可以使用流动系统来善用腺苷衍生物的化学检测，将大约30 pmol/注射量的腺嘌呤（S/N = 3）检测到化学效应。将来，我们将通过高性能液相色谱（HPLC）研究腺嘌呤相关化合物的分离条件，并使用柱后试剂研究化学发光衍生化条件，并同时开发一种含有DNA等的腺嘌呤化合物的分析方法。此外，通过这种衍生化反应分离化学发光衍生物并揭示其结构和特性在开发化学发光试剂中非常重要，因此我们计划也计划进行研究。