アデニン関連化合物のHPLC-化学発光検出システムの開発と生体試料分析への応用

腺嘌呤相关化合物HPLC-化学发光检测系统的开发及其在生物样品分析中的应用

• 批准号: 06772105
• 负责人: 黒田 直敬
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772105/
• 关键词: アデニン; フェニルグリオキサール; 化学発光検出; 高速液体クロマトグラフィー; フローインジェクション

アデニン関連化合物のHPLC-化学発光検出システムを構築するにあたり、まず、フロー系を用いて発光反応条件を検討した。 アデニンとフェニルグリオキサールとの反応によって得られる化学発光誘導体の発光観測には、過酸化水素、アルカリ水溶液、ジメチルホルムアミド(DMF)等が必要である。 そこで以下に述べるフローインジェクションシステムをモデルとして化学発光検出を試みた。 溶液A:キャリヤ-溶液、イソプロパノール(2-PrOH);溶液B:過酸化水素及び2-メルカプトエタノール(2-ME)を含む2-PrOHとDMFの等量混液;溶液C:NaOH水溶液。これらの溶液の送液は1台のペリスタ型ポンプを用いて行った。 キャリヤ-溶液中に注入(10μL)された試料は、まず溶液Bと混和され、次いで溶液Cと合流したのち化学発光検出器に導かれる。試料にはアデニンとフェニルグリオキサールの反応混液を使用した。その結果、例えば、50mM過酸化水素、5mM2-ME及び0.15MNaOHを用いてそれぞれの流速を1.8mL/minに設定した場合、約30pmol/注入量のアデニンが検出でき(S/N=3)、フロー系を用いてアデニン誘導体の化学発光検出が可能であることが判明した。 今後、アデニン関連化合物の高速液体クロマトグラフィー(HPLC)による分離条件の検討、並びにポストカラム試薬による化学発光誘導体化条件の検討を行い、DNA等を含むアデニン化合物の一斉高感度分析法の開発を行う予定である。また、本誘導体化反応による化学発光誘導体を単離し、その構造・性質を明かにすることは、化学発光試薬を開発するうえで非常に重要であるため、これについても検討を行っていく予定である。

ア デ ニ ン masato even compound の HPLC - chemical 発 検 out light シ ス テ ム を build す る に あ た り, ま ず, フ ロ を ー department with い て 発 light anti 応 conditions を beg し 検 た. ア デ ニ ン と フ ェ ニ ル グ リ オ キ サ ー ル と の anti 応 に よ っ て have ら れ る chemical 発 photoinduced の 発 観 light measuring に は, acidic water element, ア ル カ リ aqueous solution, ジ メ チ ル ホ ル ム ア ミ ド (DMF), and other necessary で が あ る. そ こ で に below mentioned べ る フ ロ ー イ ン ジ ェ ク シ ョ ン シ ス テ ム を モ デ ル と し て chemical 発 light 検 try out を み た. Solution A:キャリヤ- solution, ソプロパノ ソプロパノ ソプロパノ ソプロパノ (2-PrOH); Solution B: A mixture of peracidified hydrolysin and び2-メ <s:1> カプトエタノ カプトエタノ と <e:1> (2-me)を containing む2-PrOHとDMF <e:1> in equal amounts; Solution C: Aqueous solution of NaOH. <s:1> れら <s:1> solution <e:1> delivery <e:1> 1 unit <e:1> ペリスタ type ポ プを プを line った. キ ャ リ ヤ - に injected 10 mu (L) in the solution さ れ た try は, ま ず solution と B mixed さ れ, い で solution C と confluence し た の ち chemical 発 light 検 extractor に guide か れ る. The test sample に, アデニ, とフェニ, とフェニ, グリ, グリ, キサ, <s:1> reverse 応 mixture を is used with た た. そ の results, え ば, 50 mm acidification of water element, 5 was 0.15 - ME and び MNaOH を with い て そ れ ぞ れ の set flow rate 1.8 mL/min に を し た occasions, about 30 pmol/injection の ア デ ニ ン が 検 out で き (S/N = 3), フ ロ を ー department with い て ア デ ニ ン inductor の chemical 発 light 検 が possible Youdaoplaceholder0 である とが judge d 'arte た. In the future, ア デ ニ ン masato even compound の high-speed liquid ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー (HPLC) に よ る separation conditions の beg and び 検 に ポ ス ト カ ラ ム try 薬 に よ る chemical mineralization condition 発 photoinduced の 検 line for を い, such as DNA contains を む ア デ ニ ン compound の a 斉 Gao Gan analysis の open 発 を line う designated で あ る. ま た, the induction of body against 応 に よ る chemical 発 photoinduced を 単 し, そ の structure, nature を Ming か に す る こ と は, chemical 発 light try 薬 を open 発 す る う え で very important で に あ る た め, こ れ に つ い て も 検 line for を っ て い く designated で あ る.

项目成果

Nakashima,Kenichiro: "High-performance liquid chromatographic determination of short-chain aliphatic aldehydes using 4- (N,N-dimethylaminosulphonyl) -7-hydrazino-2,1,3-benzoxadiazole as a fluorescence reagent" J.Chromatogr.B. 661. 205-210 (1994)

Nakashima，Kenichiro：“使用 4-（N,N-二甲基氨基磺酰基）-7-肼基-2,1,3-苯并恶二唑作为荧光试剂测定短链脂肪醛的高效液相色谱法”J.Chromatogr.B。

Nakashima,Kenichiro: "High-performance liquid chromatographic determination of hydrogen peroxide with peroxyoxalate chemiluminescence detection" J.Liquid Chromatogr.17. 2111-2126 (1994)

Nakashima，Kenichiro：“过氧草酸盐化学发光检测的高效液相色谱法测定过氧化氢”J.Liquid Chromatogr.17。

Nakashima,Kenichiro: "Evaluation of lophine derivatives as chemiluminogen by a flow injection method" Anal.Chim.Acta. in press (1995)

Nakashima，Kenichiro：“通过流动注射法评价洛芬衍生物作为化学发光剂”Anal.Chim.Acta。

Nakashima,Kenichiro: "Peroxyoxalate chemiluminescent assay for oxidase activities based on detecting enzymatically formed hydrogen peroxide" J.Biolum.Chemilum.(in press). (1995)

Nakashima，Kenichiro：“基于检测酶促形成的过氧化氢的氧化酶活性的过氧草酸化学发光测定”J.Biolum.Chemilum.（出版中）。