(24R)-24,25-ジヒドロキシビタミンD_3酵素イムノアッセイの開発

(24R)-24,25-二羟基维生素D_3酶联免疫分析法的开发

• 批准号: 06772101
• 负责人: 小林 典裕
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772101/
• 关键词: ビタミンD; (24R)-24,25-ジヒドロキシビタミンD_3; ハプテン合成; 抗体産生; 酵素イムノアッセイ; イムノアフィニティークロマトグラフィー

(24R)-24,25-ジヒドロキシビタミンD_3[24,25(OH)_2D_3]は,従来,不活性なビタミンD_3代謝物とされてきた.しかし最近,骨形成作用を有する可能性が示唆され,新しい骨疾患治療薬として期待されている.このため,簡便で迅速な体液中24,25(OH)_2D_3定量法の確立が切望されているが,現在,満足のいく方法はみられない.そこで,24,25(OH)_2D_3酵素イムノアッセイ(EIA)の開発を目的として新規ハプテンを合成し,抗24,25(OH)_2D_3特異抗体の調整を試みた.【実験・結果】まず,ハプテン3-HG[24,25(OH)_2D_33-hemiglutarate]及び11a-HG[11a-hemiglutaryloxy-24,25(OH)_2D_3]を,それぞれデヒドロエピアンドロステロン及びその11a-水酸化体を出発物質に用い,各々19工程,22工程で合成した.ついで,11a-HGのウシ血清アルブミン結合体を調整してウサギ3羽を免疫し,得られたポリクローナル抗24,25(OH)_2D_3抗体(Ab-11)3種の諸性質をRIAにより検討した.これらはいずれも優れた力価(至適希釈率1:25000-1:330000)と親和力(Ka=0.2-1.0×10^<10>M^1)を示し,極めて高感度な検量線を与えた.また,側鎖構造の識別能にやや欠けるものの,24,25(OH)_2D_3のA環部分を良好に認識することが判明した.【考察】ハプテン3-HGを用いて免疫するとき,側鎖の認識に優れ,Ab-11のそれと相補的な特異性の抗体(Ab-3)が得られるものと期待される.したがって,Ab-3またはAb-11のいずれか一方を用いてイムノアフィニティークロマトグラフィー(IAC)を行い,試料から妨害代謝物を除去したのち,もう一方の抗体によるEIAに付すことで,信頼性の高い測定値が得られるものと期待される.現在,本IAC/EIAシステムの開発を検討中である.

(r) - 24 - ジ ヒ ド ロ キ シ ビ タ ミ ン D_3 24, 25 (OH) _2D_3] [は, 従, not active な ビ タ ミ ン D_3 metabolites と さ れ て き た. し か し recently, bone formation effect を have す が る possibility in stopping さ れ, new し い bone disease treatment 薬 と し て expect さ れ て い る. こ の た め, simple で newsletter Speed な fluids in 24, 25 (OH) _2D_3 の quantitative method to establish が eager さ れ て い る が, now, against the foot の い く method は み ら れ な い. そ こ で, 24, 25 (OH) _2D_3 enzyme イ ム ノ ア ッ セ イ (EIA) の open 発 を purpose と し て new rules ハ プ テ ン し を synthesis, 24, 25 (OH) _2D_3 Try different antibodies の adjustment を み た. 【 be 験 · results 】 ま ず, ハ プ テ ン 3 - HG [24, 25 (OH) _2D_33 - hemiglutarate] and a - HG び 11 [11 a - hemiglutaryloxy - 24, 25 (OH) _2D_3] を, そ れ ぞ れ デ ヒ ド ロ エ ピ ア ン ド ロ ス テ ロ ン and び そ の 11 a - water acidification body を に 発 substance use い, each 々 19 engineering, and engineering で synthetic し た. つ い で, 11 a - HG の ウ シ serum ア ル ブ ミ ン combination を adjustment し て ウ サ ギ 3 feather を immune し have ら れ た ポ リ ク ロ ー ナ ル resistance to 24, 25 (OH) _2D_3 antibodies (Ab - 11) three の sex Beg し qualitative を RIA に よ り 検 た. こ れ ら は い ず れ も optimal れ 価 た force (to the optimal 釈 rate 25 000-0000) went と affinity (Ka = 0.2-1.0 * 10 ^ < > 10 M ^ (1) を し, extremely め て Gao Gan degrees な を 検 quantity line and え た. ま た, side chain structure の can identify に や や owe け る も の の, 24, 2 Part 5 (OH) _2D_3 の A ring を good す に understanding る こ と が.at し た. [investigation] ハ プ テ ン 3 - HG を with い て immune す る と き, side chain の know に optimal れ, Ab - 11 の そ れ と phase of な specific の antibody (Ab - 3) が ら れ る も の と expect さ れ る. し た が っ て, Ab - 3 ま た は Ab - 11 を の い ず れ か party with い て イ ム ノ ア フ ィ ニ テ ィ ー ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー (IAC) を い, sample か ら sabotage metabolites を remove し た の ち, も う side の antibody に よ る EIA に pay す こ と で, letter 頼 sex の high い determination of numerical が ら れ る も の と expect さ れ る. Now, this IAC/EIAシステム システム is publishing を検 for である.

项目成果

Norihiro Kobayashi: "Specificity of the polyclonal antibodies raised against a novel 25-hydroxyvitamin D_3-bovine serum aldumin conjugate linked throuqh the C-11a position" J.Steroid Biochem.Mol.Biol.48. 567-572 (1994)

Norihiro Kobayashi：“针对通过 C-11a 位点连接的新型 25-羟基维生素 D_3-牛血清 aldumin 缀合物产生的多克隆抗体的特异性”J.Steroid Biochem.Mol.Biol.48。

Norihiro Kobayashi: "Syntheses of 11a-(4-carboxypropanoyloxy)-1a,25-dihydroxyvitamin D_3 and 11a-(4-carboxybutanoyloxy)-1a,25-dihydroxyvitamin D_3:Novel haptenic derivatives for production of highly specific antibodies to 1a,25-dihydroxyvitamin D_3" J.Che

Norihiro Kobayashi：“11a-(4-羧基丙酰氧基)-1a,25-二羟基维生素 D_3 和 11a-(4-羧基丁酰氧基)-1a,25-二羟基维生素 D_3 的合成：用于生产 1a,25- 高度特异性抗体的新型半抗原衍生物

Norihiro Kobayashi: "Synthesis of (24R)-11a-(4-carboxybutyryloxy)-24,25-dihydroxyvitamin-D_3:A novel haptenic derivative producing antibodies of hiqh affinity for (24R)-24,25-dihydroxyvitamin D_3" J.Chem.Soc.,Perkin Trans.1. 269-275 (1994)

Norihiro Kobayashi：“(24R)-11a-(4-羧基丁酰氧基)-24,25-二羟基维生素-D_3 的合成：一种新型半抗原衍生物，可产生对 (24R)-24,25-二羟基维生素 D_3 具有高亲和力的抗体”J.Chem

Norihiro Kobayashi: "Production of a group-specific antibody to 1a,25-dihydroxyvitamin D and its derivatives having the 1a,3β-dihydroxylated A-ring structure" Steroids. 59. 404-411 (1994)

Norihiro Kobayashi：“针对 1a,25-二羟基维生素 D 及其具有 1a,3β-二羟基化 A 环结构的衍生物的组特异性抗体的生产”类固醇。 59. 404-411 (1994)