アルデヒド類のHPLC化学発光法の開発と生体関連物質分析への適用

アルデヒド類に高感度な化学発光誘導体化試薬として、4,5-ジアミノフタルヒドラジド(DPH)を開発した。DPHは、弱酸性下アルデヒド類と反応し、ベンズイミダゾール誘導体を生成する。生じたベンズイミダゾール誘導体は、アルカリ性下、フェリシアン化カリウムの存在で過酸化水素と反応し化学発光する。これを利用して、まずアルデヒド類の高感度HPLC化学発光検出による基本的定量法を設定した。モデル化合物として芳香族アルデヒドを3種(ベンズアルデヒド、p-アニスアルデヒド、p-トルアルデヒド)脂肪族アルデヒドとしてエナントアルデヒドを選び、HPLC条件及び最適化学発光誘導体化条件の検討を行った。アルデヒド類は、塩酸酸性下、加熱することによりDPH誘導体となった。これら誘導体は、単一溶離逆相HPLCにより20分以内に分離検出された。本法の検出限度は、10fmolレベルと高感度であった。次に、DPHによる反応生成物の構造及びその発光特性を調べる目的で、p-カルボキシアルデヒド及びp-トルアルデヒドについて、その反応生成物を単離した。生成物は、種々の機器データから図のようなベンズイミダゾール構造であることを明らかにした。さらにこれら誘導体の発光特性を調べる目的で、種々の発光条件をルミノールと比較しながら検討した。その結果、これらの化学発光体は、ルミノールに比べ、3から7倍強く発光することがわかった。現在本誘導体化法を生体内DBH活性測定に応用検討中である。また、反応生成物は、発光試薬として、過酸化物計測などに適用可能である。

アルデヒド類に高感度な化学発光誘導体化試薬として、4,5-ジアミノフタルヒドラジド(DPH)を開発した。DPHは、弱酸性下アルデヒド類と反応し、ベンズイミダゾール誘導体を生成する。生じたベンズイミダゾール誘導体は、アルカリ性下、フェリシアン化カリウムの存在で過酸化水素と反応し化学発光する。これを利用して、まずアルデヒド類の高感度HPLC化学発光検出による基本的定量法を設定した。モデル化合物として芳香族アルデヒドを3種(ベンズアルデヒド、p-アニスアルデヒド、p-トルアルデヒド)脂肪族アルデヒドとしてエナントアルデヒドを選び、HPLC条件及び最適化学発光誘導体化条件の検討を行った。アルデヒド類は、塩酸酸性下、加熱することによりDPH誘導体となった。これら誘導体は、単一溶離逆相HPLCにより20分以内に分離検出された。本法の検出限度は、10fmolレベルと高感度であった。次に、DPHによる反応生成物の構造及びその発光特性を調べる目的で、p-カルボキシアルデヒド及びp-トルアルデヒドについて、その反応生成物を単離した。生成物は、種々の機器データから図のようなベンズイミダゾール構造であることを明らかにした。さらにこれら誘導体の発光特性を調べる目的で、種々の発光条件をルミノールと比較しながら検討した。その結果、これらの化学発光体は、ルミノールに比べ、3から7倍強く発光することがわかった。現在本誘導体化法を生体内DBH活性測定に応用検討中である。また、反応生成物は、発光試薬として、過酸化物計測などに適用可能である。