ウシ副腎におけるアルドステロン生合成調節機構に関する研究

牛肾上腺醛固酮生物合成调控机制研究

• 批准号: 06772156
• 负责人: 大野 修司
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772156/
• 关键词: OMM-Cyt.b; SDAR

電解質代謝をつかさどる重要な役割を担っているアルドステロンは,副腎皮質ミトコンドリアにおいて11-デオキシコルチコステロンからコルチコステロン,18-ヒドロキシコルチコステロンを経由して生合成されている。ウシ副腎におけるこれらの反応はすべて単一CYP分子により触媒されているが,特に最終ステップのみがアスコルビン酸塩添加により飛躍的に促進されることが明かとなった。これらの結果から,既知の電子伝達系とは別に,bタイプチトクロム(Cyt.b)およびSemidehydroascorbate reductase(SDAR)がこの反応に特異な電子伝達成分として関与している可能性が示唆されるに至っている。ラット肝臓ミトコンドリア外膜由来OMM-CytbはAkio Itoによって精製され,その抗体がSDAR活性を特異的に阻害することから,両者は同一分子であることが予想されている。本研究ではウシ副腎におけるステロイド調節機構の解明を目的として,副腎ミトコンドリア画分を原料とし,吸収スペクトルを指標としてCyt.bの精製を試みた。はじめにウシ副腎100個から髄質部分を取り除き,ミトコンドリア画分を常法により調製した。低張液中でミトコンドリアを破壊した後,Itoの方法に基づきTrypsinによる可溶化処理を行った。その後Sephadex G-100,DEAE-Celluloseカラムにより極めて効率よくチトクロームの吸収を示す画分が得られ,さらにハイドロキシアパタイトの溶出条件を注意深く検討したところ,最終的にSDS-PAGEゲル上単一バンドが得られ,この標品は分子量約12700,赤色で明らかにbタイプチトクロムの吸収スペクトルを示すことが確認された。最終的には,約7.6gのミトコンドリア画分より0.31mgタンパク質標品が得られ,チトクローム含量を指標としてTrypsin可溶化後の画分から313倍に精製された。今後さらにミクロゾーム由来のCyt.b5との差について,またSDAR活性を指標として精製を試み,再構成実験によるアルドステロン調節機構に迫りたいと願っている。

Electrolyte metabolism is an important part of the process, and the adrenal cortex is composed of 11-, 18-, and 18-dimensional elements. It is the first time that a CYP molecule has been added to the reaction system. The results show that the known electron transfer system is different from the known electron transfer system (Cyt.b) and Semidehydrosorbate reductase(SDAR), and the reverse electron transfer system is different from the known electron transfer system (Cyt.b) and Semidehydrosorbate reductase(SDAR). OMM-Cyt b is a purified antibody that specifically inhibits SDAR activity, and the antibody is a member of the same molecule. The purpose of this study is to clarify the mechanism of the accessory kidney, and to try to refine the accessory kidney. The 100-part quality of the kidney is divided into two parts, and the three parts are divided into two parts. After the dissolution of the solution,Ito's method is based on the solubilization of the solution. After further investigation on Sephadex G-100,DEAE-Cellulose, the molecular weight of the standard was about 12700, and the absorption of the standard was confirmed by SDS-PAGE. The final product is about 7.6g, 0.31mg, and the final product is 313 times more refined after Trypsin solubilization. In the future, the origin of Cyt.b5 and the difference between them will be tested, and the SDAR activity index will be refined, and then the control mechanism of the system will be formed.

项目成果

Sizuo NAKAJIN: "Purification and Characterization of 3α/β-Hydroxysteroid Dehydrogenase from Mature Porcine Testicular Cytosol." J.Steroid Biochem.Molec.Biol.48. 249-256 (1994)

Sizuo NAKAJIN：“来自成熟猪睾丸细胞溶胶的 3α/β-羟基类固醇脱氢酶的纯化和表征。”J.Steroid Biochem.Molec.Biol.48 (1994)。