ムチン型糖鎖に発現する癌関連抗原の構造とその発現様式に関する研究

粘蛋白型糖链表达的癌症相关抗原的结构和表达模式研究

• 批准号: 06772163
• 负责人: 黒坂 光
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto Sangyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772163/
• 关键词: 単クローン抗体; 癌関連糖鎖抗原; ムチン

細胞の癌化に伴い,細胞表面の複合糖質に変異が生じ,細胞が新たな抗原性を獲得することが知られているが,糖タンパク質糖鎖に特異的な癌関連抗原は、わずか3種類が報告されているにすぎない。そこで、牛顎下腺ムチンを免疫原として,ムチン型糖タンパク質特異的な単クローン抗体を作製した。それらのうちのいくつかは,ヒト卵巣癌組織と反応したため,その抗体の反応特異性と,抗原の発現様式について解明した。(1)ヒト卵巣癌組織と反応する単クローン抗体が認識する糖鎖構造の解析(a)種々の複合糖質と抗体との反応性の検討卵巣癌組織と反応する単クローン抗体の1つの6G9は,免疫原のBSMとは強く反応する一方で,アシアロBSMや,de-O-acetyl BSM,ヒツジ顎下腺ムチン,ヒト胎便糖タンパク質などとは反応しなかった。(b)抗体の認識する糖鎖構造の決定1.グリコシダーゼ消化 BSMをシアリダーゼ消化すると反応性を消失したことから,抗体は,シアル酸を含む糖鎖を認識している。2.糖鎖の単離とその反応性の検討 BSMから単離した,O-acetyl基を含む糖鎖は,抗体との結合活性を保持していた。この糖鎖を,HPLCで分画したところ,低分子のシアル酸を含む画分が抗体との反応性を持っており,O-acetyled sialyl Tn抗原を抗体が認識していると推定することが出来た。(2)ムチン型糖鎖に発現する癌関連糖鎖抗原の発現様式の解析について(a)抗体と培養癌細胞の反応性の検討 ヒト結腸癌培養癌細胞の約10%ほどの細胞が,単クローン抗体と反応した。染色の様子から,抗原は,細胞表面に局在しているように思われた。(b)抗原分子の精製 単クローン抗体を固相化した樹脂を用いたアフィニティークロマトグラフィーにより,培養癌細胞から抗原分子を部分的に精製した。抗原分子のを解析するために,さらに精製を進める予定である。

Cancer is associated with cell transformation, and complex glycoproteins on cell surfaces are produced differently. Cell antigen acquisition is known to be associated with cancer, and three types of glycoproteins are reported. In addition, the immune system of bovine submandibular gland is used to produce anti-tumor antibodies specific to the type of carbohydrate. The anti-tumor specificity of the antibody and the expression pattern of the antigen are explained. (1)Analysis of carbohydrate lock structure in human ovarian cancer tissues and antibodies (a) complex carbohydrate and antibodies and anti-tumor antibodies (b) BSM of immunogen and strong anti-tumor antibody (c) BSM,de-O-acetyl BSM, anti-tumor antibody (d). (b)The determination of the structure of the glycan in the antibody 2. The binding activity of the antibody was maintained when the O-acetyl group was added to the antibody. The antibody to the O-acetylated sialyl Tn antigen was identified by HPLC analysis. The antibody to the O-acetylated sialyl Tn antigen was identified by HPLC. (2)Analysis of the Expression Pattern of Cancer-Associated Glycolock Antigen in the Development of C-type Glycolock (a) Antibodies and Antibodies in Cultured Cancer Cells About 10% of Colon Cancer Cultured Cancer Cells are Antibodies. Staining and antigen, the cell surface is in the middle of the brain. (b)Antigen molecules are purified by solid-phase resin. Antigen molecules are analyzed and refined.