ヒト腸癌細胞に存在する癌関連糖鎖抗原の発現機序と生物学的意義について

人肠癌细胞中癌症相关糖抗原的表达机制及生物学意义

• 批准号: 01580177
• 负责人: 中田 博
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kyoto Sangyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01580177/
• 关键词: 単クロ-ン抗体; ムチン型糖タンパク質; 癌関連糖鎖抗原; Tn抗原

ヒト腸癌細胞培養細胞株LS180細胞をヌ-ドマウス背皮下に注射し、腫瘍組織を大量に調製した。アセトン粉末にした後、可溶化し、セファロ-ス6Bカラムクロマトグラフィ-、WGAアガロ-スアフィニティクロマトグラフィ-、抗体カラムによるアフィニティクロマトグラフィ-等を用いて、MLS102、MSW113抗原を持つ糖タンパク質を精製した。更に、フッ化水素による化学的処理あるいは酵素処理により糖鎖を除去し、一次精造を解析中である。一方、単クロ-ン抗体MSW113の認識する糖鎖構造についても検討した。ヒトミルクより抗体カラムを用いてオリゴ糖を単離し、構造を明らかにしたところ、いずれもシアリルLe^aを基本構造とするものであった。また、単クロ-ン抗体MLS128を新たに調製し、Tn抗原を認識する抗体であることを明らかにした。羊顎下腺ムチン(OSM)を用いて、エピト-プの構造決定を試みた。すなわち、アシアロOSMを様々なプロテア-ゼ処理した後MLS128抗体カラムを用いたアフィニティクロマトグラフィ-によりエピト-プを含む断片を得た。更に、逆相系のHPLCにより糖ペプチドを精製し、シ-ケンサ-により一次構造を決定した。その結果、得られた糖ペプチドの内最小のものはLeu-Ser(GalNAc)-Glu-Ser(GalNAc)-Thr(GalNAc)-Thr(GalNAc)-Gln-Leu-Pro-Glyであった。SerあるいはThrにGalNAc残基が1個結合したもの、あるいは2個連続して結合したものは他の糖ペプチドにも存在することから、MLS128は上記の構造の内、GalNAc残基が3個連続して結合した構造を認識するものと考えられる。更にTn赤血球膜のグリコホリンAのN末近傍にも同様の構造が存在することからも、上記の構造が必須であることが強く示唆された。

The LS180 cell line of cancer cell culture was injected subcutaneously on the back, and a large number of tissues were collected. After the powder was dissolved, the powder was dissolved, the To change the chemical properties of water, enzyme, sugar removal, and a refined process of analysis. One party, anti-MSW113 antibody, did not know that the sugar had been made. Please tell me that the antibodies are isolated from the sugar, that is, the sugar is isolated, that the sugar is isolated, that the antibodies are isolated, and that the antibodies are not detected. Anti-MLS128, anti-Tn antigen, antibody, antibody, antibody. Sheep subglandular glands (OSM) were used to determine the size of the animal. The mls128 antibody was detected in the OSM after the treatment. The reverse phase is to make a decision on HPLC, sugar, sugar, and sugar in a single time. The results showed that the minimum concentration Leu-Ser (GalNAc)-Glu-Ser (GalNAc)-Thr (GalNAc)-Thr (GalNAc)-Gln-Leu-Pro-Gly was detected. One combination of Thr GalNAc residues, one combination of two links, one of the combination of two links, the one of the combination of two links, the To change the Tn red blood cell membrane test, there is an error in the end of the red blood cell membrane, and it is necessary to strongly indicate that the red blood cell membrane is not valid.

项目成果

北川裕之: "Occurrence of tetra-and pentapentasaccharideo with the sialyl-Le^a structure in human milk" J.Biol Chem. (1990)

Hiroyuki Kitakawa：“人乳中具有唾液酸 Le^a 结构的四糖和五糖的出现”J.Biol Chem（1990 年）。

中田博: "Tn抗原を認識する単クロ-ン抗体MLS128の性質" 癌. 323 (1989)

Hiroshi Nakata：“识别 Tn 抗原的单克隆抗体 MLS128 的特性”癌症 323 (1989)。

北川裕之: "TRree Novel Olygosaccharicles with the Sialyl-Le^a Structure in Human Milk Isolation by Immunoaffinity Chromatography" Biochemistny. 28. 8891-8897 (1989)

Hiroyuki Kitakawa：“通过免疫亲和色谱法分离人乳中具有唾液酸 Le^a 结构的新型寡糖”生物化学 28. 8891-8897 (1989)。

沼田義人: "A monoclonal antibody directed to Tn antigen" FEBS Lett.

Yoshito Numata：“针对 Tn 抗原的单克隆抗体”FEBS Lett。

福井成行: "Characterization of antigens recognized by monoclonal antibodies,MLS102 and MLS103 which were raised against human color cancer cells" J.Biochem.

Nariyuki Fukui：“针对人类彩色癌细胞的单克隆抗体 MLS102 和 MLS103 识别的抗原的表征”J.Biochem。