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ヒト腸癌細胞に存在する癌関連糖鎖抗原の発現機序について

人肠癌细胞中癌症相关碳水化合物抗原的表达机制

基本信息

批准号：
63580130
负责人：
中田博
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Kyoto Sangyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63580130/
关键词：
単クローン抗原癌関連糖鎖抗原ムチン型糖タンパク質

项目摘要

今年度はヒト腸癌細胞に存在する癌関連糖鎖抗原を単離し、その性質について検討した。ヒト腸癌由来細胞培養株LS180細胞をヌードマウスの背皮下に注射し、3週間後に固形癌を採取した。固形癌よりアセトン粉末を調製し、塩溶液で抽出した。抽出物をセファロース6Bのカラムで分画したところ、単クローン抗体MLS102と反応する抗原の多くは素通り画分に回収された。素通り画分をWGA-アガロースのカラムに通し、O、IMN-アセチルグルコサミンで溶出した。その溶出画分を還元アルキル化後、MLS102-セファロースの抗体カラムに通し洗浄後、2Mチオシアン酸ナトリウムで溶出した。精製標品のSDS-PAGEでは高分子のムチン様糖タンパク質の他に、分解物と思われるバンドが検出された。夾雑物か否かを見る目的でそれらのバンドをニトロセルロース膜にウェスタンプロッティングし、MLS102で検出したところ、すべてのバンドが反応した。従って、すべてのバンドを癌関連糖鎖抗原をもつ糖タンパク質と考え、そのポリペプチド鎖の一次構造を検討中である。次にこの糖タンパク質のLS180細胞における存在状態について検討した。^3H-グルコサミンでLS180細胞を標識し、細胞分画を行なった。各画分より抗原糖タンパク質を回収したところ、大半の糖タンパク質はミクロゾーム画分に回収された。さらに標識した細胞の表面にMLS102を結合させ、十分に洗浄後、細胞を可溶化し抗原を免疫沈降したところ、約90%の抗原が回収され、抗原糖タンパク質は細胞表面に存在することがわかった。また、抗原糖タンパク質は高濃度の塩溶液で遊離することから末梢膜タンパク質であることがわかった。

This year, the presence of cancer-associated glycogen in colorectal cancer cells is discussed in detail. Colorectal cancer derived cell culture line LS180 cells were injected subcutaneously into the back and solid cancer cells were harvested 3 weeks later. Solid cancer powder preparation, extraction of solution The extract was extracted from the MLS 6B and the antibody MLS102 was extracted from the MLS 6B and the antibody MLS 6B was extracted from the MLS 6B. In addition, the dissolution of WGA-100 and IMN-100 was also investigated. After the dissolution of MLS102- 2, the antibody was dissolved in 2M solution. SDS-PAGE of the refined standard shows that the polymer is a mixture of sugar and other substances, and that the decomposition substance is a mixture of substances. The MLS102 has been designed to be able to detect the presence and absence of any trace elements. The primary structure of the cancer associated carbohydrate antigen is discussed. The next step is to investigate the presence of sugar in LS180 cells.^ 3 H-cell labeling and cell sorting for LS180 cells Each of the three groups of antigens was identified and most of them were identified. MLS102 is bound to the surface of the cells, and after washing, the cells are solubilized, the antigens are immunodeposited, and about 90% of the antigens are recovered, and the antigens are present on the surface of the cells. The antigen sugar is free from the high concentration of the solution.