カルボキシルトランスフェラーゼのアセチル-CoA結合部位の構造解析

羧基转移酶乙酰辅酶A结合位点的结构分析

• 批准号: 06780511
• 负责人: 数田 恭章
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyushu Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780511/
• 关键词: アセチル-CoAカルボキシラーゼ; アセチル-CoA結合部位; ピリドキサールリン酸; ビスピリドキサールリン酸; 化学修飾

大腸菌アセチル-CoAカルボキシラーゼのサブユニットのうちの一つであるカルボキシルトランスフェラーゼ(CT)のアセチル-CoA結合部位の構造を解析する目的でピリドキサールリン酸誘導体を中心にして,化学修飾実験を行った.検索を行った試薬のうち,ピリドキサールリン酸(PLP)及びビスピリドキサールリン酸(bis(PLP))によりCTは効果的に化学修飾され,その酵素活性が消失することがわかった.特に反応できる活性なアルデヒド基を二つ有するbis(PLP)を用いた化学修飾実験ではCTの二つのサブユニットであるα及びβサブユニットの架橋反応が観察された.この架橋反応は失活反応とほぼ一対一で対応していた.また基質であるアセチル-CoAの共存下,PLPあるいはbis(PLP)による修飾反応を行ったところ,その失活反応が抑制されたことにより,これら両試薬はCTのアセチル-CoA結合部位に結合することにより,その失活を引き起こすと考えられた.またbis(PLP)を用いた架橋反応に及ぼすアセチル-CoAの効果について検討したところ,アセチル-CoAの存在によりCTのα及びβサブユニットのbis(PLP)による架橋反応は顕著に抑制されることが分かった.この結果よりCTのアセチル-CoA結合部位はCTのα及びβサブユニットのサブユニット間領域に存在することが明らかとなった.これら両化合物の反応性から,CTのアセチル-CoA結合部位には活性に必須のリジン残基が存在することが明らかとなった.またbis(PLP)より架橋反応が起こることから,そのリジン残基に近接してもう一つ別のリジン残基が存在することが分かった.

The purpose of this study is to analyze the structure of the joint part of the bacteria (CT), the joint part of the CoA, the center of the body, and the chemical repair. The chemical modification of the fruit was caused by the loss of enzyme activity, and the loss of enzyme activity, the chemical modification of acid (PLP) and CT acid (bis (PLP)). Special attention was paid to the chemical modification of bis (PLP). The chemical modification method was used to determine the concentration of α and β compounds. Inactivation, inactivation In the case of the co-existence of the precursors, the PLP, the bis (PLP), the reverse, the inactivation, the inhibition, the combination of the CT and the CoA, the inactivation, the correction, the correction, the inactivation, the inactivation, the combination of the two parts, the combination of the two parts, the inactivation and the inactivation. The words "bis (PLP)" and "CoA" are used in this paper. The results show that there are "CT" α and "β"CT" and "β"CT" and "β" in the "CoA". The results show that the combination of CT and CoA is sensitive to the presence of CT α and β in the field of space. The chemical reaction of the compound is reversed, and the activity of the binding site of CT-CoA must be confirmed by the presence of the residue of the compound. In the bis (PLP) frame, there is a gap between the residues, the proximity of the residues and the presence of the residues.