原索動物ホヤ類の筋膜平滑筋細胞におけるコネクチン様弾性タンパク質の研究

原索类海鞘筋膜平滑肌细胞连接素样弹性蛋白的研究

• 批准号: 06780574
• 负责人: 中内 祐二
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780574/
• 关键词: コネクチン; 弾性タンパク質; マボヤ; Connectin; Titin; Halocynthia roretzi; 原索動物; 平滑筋

マボヤ成体の体壁筋(縦走筋、環状筋)に存在するコネクチン様タンパク質は見かけの分子量が2000Kのもの1種類であると1992年に筆者らは報告したが、当時の電気泳動の系の技術的な問題からゲル上で1本に見えているコネクチン様タンパク質のバンドが1種類のタンパク質から構成されているのかどうか、またその見かけの分子量の精度については判断できていなかった。そこで今回改めて濃度勾配の緩やかなポリアクリルミドゲル(2.3-4%)を用いて電気泳動を行い、更に低タンパク量のバンドを検出するために銀染色を行った。その結果マボヤ体壁筋のSDS全抽出物の電気泳動像には二種類の高濃度のコネクチン様タンパク質(見かけの分子量はそれぞれ3300K、2800K)と、3300Kの分解物と考えられる1本のタンパク質のバンド(同じく3000K)が存在することが新たに確認された。またこれらのタンパク質のバンドはPAS染色法では染色されないこと等からタンパク質鎖に糖鎖が結合することにより見かけの分子量が大きくなっているわけではないことが推定された。これらのコネクチン様タンパク質は抗ニワトリコネクチンモノクローナル抗体3B9と交叉反応することがわかっており、現在この3B9とマボヤ体壁筋のグリセリン筋(脱膜モデル)を用いて細胞内での局在様式を光学顕微鏡レベルで検討を行っている。またこのマボヤ体壁筋コネクチン様タンパク質に対するポリクローナル抗体を作成しており、細胞内での局在の電子顕微鏡レベルでの検討の他、定性的実験のためのタンパク質の単離実験、他の無脊椎動物におけるコネクチン様タンパク質の検索に用いる予定である。

The authors reported in 1992 that the connectin-like proteins present in the body wall muscles (longitudinal muscles, annular muscles) of adult Maboya are one type of protein with an apparent molecular weight of 2000K, but due to technical issues in the electrophoresis system at the time, it was not possible to determine whether the band of the connectin-like protein that appears on the gel is composed of a single type of protein, or the accuracy其明显的分子量。因此，使用具有温和浓度梯度的聚丙烯酰胺凝胶再次进行电泳（2.3-4％），并进行银色染色以检测蛋白质含量低的带。结果，新近证实，两种高浓度的连接蛋白样蛋白（分别为3300K和2800K的明显分子量）和一个单蛋白带（也是3000K）（也是3000K），这被认为是3300K的降解产物（也是3000K）。此外，据估计，这些蛋白质带未被PAS染色染色，并且由于糖链与蛋白质链的结合，明显的分子量不会增加。已经发现，这些类似连接蛋白的蛋白与抗chicken连接器单克隆抗体3B9交叉反应，并且使用此3B9和Maboya Body Wall suscle（一种脱甲状腺模型），在光学显微镜下在细胞内进行定位模式。我们还创建了与这种Maboya-Wall肌肉连接蛋白样蛋白的多克隆抗体，并将用于研究电子显微镜水平上的细胞内定位，并分离蛋白质以进行定性实验和在其他无脊椎动物中寻找连接蛋白样蛋白。