神経細胞微小管における神経線維と微小管関連蛋白の結合

神经纤维与神经元微管中微管相关蛋白的结合

• 批准号: 06780587
• 负责人: 宮坂 洋
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780587/
• 关键词: 微小管関連蛋白; ニューロフィラメント; 脱リン酸化

ブタ脳より精製したチュブリン蛋白をtaxol存在下で重合し微小管を形成させ、ウシ脊髄より精製しアルカリフォスファターゼ処理にて脱リン酸化したニューロフィラメントHサブユニット(NF-H)と、ブタ脳より精製した微小管関連蛋白2(MAP2)を、その微小管とインキュベーションし結合させた後、共沈実験を行った。共沈の遠心条件は、微小管及びそれに結合した蛋白は沈殿になるが、遊離のNF-HまたはMAP2は上清に残る強さとした。遠心後の沈殿の蛋白量を、SDS-PAGE上のチュブリン蛋白、NF-H、及びMAP2のバンドをdensitometerにより測定し、チュブリン蛋白のバンドの値をもとに補正して比較した。微小管へNF-H及びMAP2を同時に結合させた場合、結合したNF-Hはチュブリン蛋白を100として9.2、同じくMAP2は6.3であった。微小管へNF-Hのみを結合させた場合は、結合したNF-Hは10.9となった。また、MAP2のみを結合させた場合は、結合したMAP2は6.8となった。この結果よりNF-HとMAP2の微小管上の結合は部分的に競合すると考えられ、結合部位は隣接して存在するか、あるいは一部重なっているものと思われた。しかし、MAP2、NF-Hともその分子形態は線維状の蛋白であり、線維状に伸びた部分により、機械的に他の蛋白の結合が阻害される可能性があり、MAP2あるいはNF-Hの微小管結合部位のみを用いた実験を行う必要がある。この点については、酵素による切断で作製したMAP2の微小管結合部位のフラグメントはニューロフィラメント蛋白と結合することが知られており、微小管へNF-HとMAP2の微小管結合フラグメントを加え共沈実験を行う場合、NF-HとMAP2のフラグメントが結合し沈殿となることが考えられる。今後これらの点を解決する必要があると思われるが、一つの案としては、NF-Hをキモトリプシンでtail domainを残し切断して用いてみる事などが考えられる。

In the presence of protein taxol, coincident microtubule formation, chiropractic microtubule formation, microtubule protein 2 (MAP2), microtubule protein 2 (MAP2), microtubule formation, protein 2 (MAP2), protein 2 (protein 2), protein 2 (protein 2) After the combination of the microtubule, the microtubule and the microtubule. The cardiac conditions, microtubules and microtubules were combined with the protein, NF-H, MAP2 and the supernatant of the supernatant. After the heart, the amount of protein in the temple, the protein content on the SDS-PAGE, the NF-H, and the MAP2 protein, the protein content, the protein content, the protein content Microtubule NF-H and microtubule MAP2 were used at the same time to combine and combine the protein of NF-H and MAP2. The microtubule was combined with the NF-H device and the NF-H device. The combination of MAP2 and MAP2 was used in the first place. The results showed that there were some defects in the joint of the NF-H MAP2 microtubule, the joint of the microtubule and the joint of the microtubule. The molecular morphology of MAP2, MAP2, NF-H, and so on, the molecular morphology, the molecular morphology, the molecular In the joint of MAP2 microtubule, microtubule, NF-H, MAP2, microtubule, MAP2, microtubule, microtubule In the future, we need to know that it is necessary to do something about it, one case, one NF-H, one case, one step, one piece of work, one piece of work, one piece of cake, one day, one week, one day, one day, one week, one week