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核酸-脂質複合体への蛍光色素取り込みを利用した相補的塩基対形成の高感度検出

使用荧光染料掺入核酸-脂质复合物来高灵敏地检测互补碱基配对

基本信息

批准号：
06854039
负责人：
居城邦治
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、水面上にジアルキル型脂質と長鎖アルキル基を持つ一本鎖DNAからなる核酸-脂質複合体を作製すること、および、水相に添加した相補的なDNAとの塩基対形成を、二重鎖DNAに特異的にインターカレートされる色素からの蛍光発光を利用することで高感度に検出しようとすることにある。1.核酸-脂質複合体として、一本鎖DNAの最小単位の一つである塩基シトシンに長鎖アルキル基を導入したオクタデシルシトシンを新規に合成した。2.水面上でのインターカレーションを観察するために、色素インターカレーターであるアクリジンオレンジに長鎖アルキル基を導入したオクタデシルアクリジンオレンジを新規に合成した。3.アデノシン、シチジン、ウリジン、グアノシンをそれぞれ添加した水相上にオクタデシルシトシンの単分子膜を作製して、表面圧-面積曲線を測定した結果、水相にグアノシンが存在するときのみ安定な単分子膜の形成が確認できたことから、水面上での核酸-脂質複合体のシトシンと水相中のグアノシンとの塩基対形成が示唆された。4.核酸-脂質複合体にオクタデシルアクリジンオレンジを混合させ、水面上での蛍光顕微鏡観察を行ったところ、グアノシン水溶液上では緑色発光が認められ、水面上で形成された塩基対間へのアクリジンオレンジのインターカレーションが確認された。以上の結果より、インターカレーションによる蛍光発光を利用した水面上での塩基対形成の検出は可能であることがわかった。

The purpose of this study is: water surface lipids and long-locked alkali bases. NAからなるNucleic acid-lipid complexをProductionすること、および、Aqueous phaseにAdded and supplementedなDNA との塩対 forming を, double lock DNA ににインターカレートされThe color of the pigment is high-sensitivity and high-sensitivity. 1. Nucleic acid-lipid complex として, the smallest unit of DNA that locks DNAトシンに长 locks アルキルbased を imported したオクタデシルシトシンを新guiに综合した. 2. On the surface of the water, there is a でのインターカレーションを観泽するために, a pigment インターカレーターであるアクリジンオレンジに长 lock アルキルbased を import したオクタデシルアクリジンオレンジを新码に综合した. 3. アデノシン、シチジン、ウリジン、グアノシンをそれぞれAdd した水性上にオクPreparation of タデシルシトシンのsimple molecular membrane をして, surface pressure-area curve measurement results, water phase にThe existence of グアノシンがするときのみ the formation of stable molecular membrane がconfirmationできたことから、on the water surface The nucleic acid-lipid complex is formed in the aqueous phase through the formation of nucleic acid-lipid complexes. 4. Nucleic acid-lipid complex にオクタデシルアクリジンオレンジを mixed合させ、での蛍荕Microscope viewing on the water surface を行ったところ、グアノシンThe green light appears on the aqueous solution, and the green light appears on the water surface.へのアクリジンオレンジのインターカレーションがconfirmされた. The results of the above are used It is possible to create a の検出は on the surface of the water.