視交叉上核サーカディアン振動体の光同調機構における興奮性アミノ酸受容体の役割

兴奋性氨基酸受体在视交叉上核昼夜节律振荡器光夹带机制中的作用

基本信息

批准号：
06710032
负责人：
安倍博
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

サーカディアンリズムの光サイクルへの同調は,光情報が網膜から網膜視床下部路RHTを介してサーカディアン振動体である視交叉上核SCNへ伝えられることにより生じる.その伝達物質はglutamateなどの興奮性アミノ酸EAAで,その受容体EAA receptorのNMDA型であるとされている.本研究では,NMDA receptorがSCNにおいて実際に存在し光情報受容体としての機能をもつことを確かめる目的から,SCNにおけるNMDA receptor subunit mRNAの解剖学的局在,SCNにおける網膜投射領域,および光によるFos蛋白発現領域の神経解剖学的比較をin situ hybridization法および免疫組織化学法により検討した.以下に現在まで得られた結果をまとめる.1.in situ hybridization法によりマウスSCNにNMDA receptor subunitのうちε3 subunitのmRNAが特異的に発現した.発現領域は,SCN吻側部・尾側部では全体に,中央部では外側および背側のSCN境界部に沿った領域に限られていた.2.神経tracerであるCholera toxin Bを眼球内に注入し,SCNにおける網膜からの投射領域を免疫組織化学的に調べたところ,SCN吻側部・尾側部では全体に,中央部では外側および背側に分布し,ε3 subunit mRNAの分布とほぼ一致した.3.60分の光照射によりSCN細胞からFos蛋白が発現した.発現はSCNの吻側部・中央部・尾側部とも全体の細胞で見られたが,それぞれ腹内側部に最も強い反応が得られ,特に中央部ではε3および網膜投射領域以外の部位でも発現が見られた.しかし,NMDA receptorのantagonistであるMK-801を光照射前に投与すると,Fosの発現が制御され,特に中央部の背側部の細胞で抑制が見られた.以上の結果から,マウスSCNにおけるNMDA receptorのε3 subunit mRNAは網膜からの投射領域に分布し,さらにそれらの領域の細胞において光によるFos蛋白発現に関与することが示唆された.現在この関係をさらに直接的に確かめるために,非放射性物質を用いたin situ hybridization法による同一切片上での多重染色を試みている.以上の他にゴールデンハムスターを用いて,そのSCNにおける光によるFos発現にsubstance P receptorが関与することを,そのantagonistを用いて確かめた.

当通过视网膜下丘脑道RHT传递光学信息，将光子节奏调整为光学周期会发生光周期。发射器是一种兴奋性氨基酸EAA，例如谷氨酸，据说是其受体EAA受体的NMDA类型。在这项研究中，我们研究了NMDA受体亚基mRNA在SCN中的解剖学定位，SCN中的视网膜投影区域以及FOS蛋白表达的区域，通过光使用原位杂交和免疫组织化学。迄今为止获得的结果总结了下面。1。原位通过杂交在小鼠SCN中特别表达了NMDA受体亚基的ε3亚基mRNA。该表达区域仅限于SCN的整个尾部和尾部，以及中央部分中SCN的外侧和背部。2。将霍乱毒素B（一种神经示踪剂）注射到眼睛中，对SCN中视网膜的投影区域进行了免疫组织化学检查。 SCN分布在整个尾部和尾部，以及ε3亚基的外侧和背部。 mRNA的分布几乎与mRNA的分布一致。 3.60分钟的光照射显示SCN细胞的FOS蛋白。在所有细胞中都观察到了SCN的尾部，中央和尾部部分中的表达，但是在腹侧部分中获得了最强的反应，尤其是在中心部分，在ε3和视网膜投影区以外的其他位点也可以看到表达。但是，当MK-801（NMDA受体的拮抗剂）在光照射之前给药时，调节FOS表达，尤其是在中心部分的背侧部分被抑制。上述结果表明，小鼠SCN中NMDA受体的ε3亚基mRNA分布在视网膜的投影区域中，并且与这些区域的细胞中的光参与了FOS蛋白的表达。为了进一步直接确认这种关系，我们有一种使用非放射活性物质的原位方法。我们尝试使用杂交方法对所有相同片段进行多次染色。除上述内容外，我们还使用金仓鼠（Golden Hamsters）来验证使用拮抗剂在SCN中通过光在光中表达的物质P受体。