魚類皮膚スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)分子の異質性

鱼皮超氧化物歧化酶（SOD）分子的异质性

基本信息

批准号：
06760185
负责人：
中野俊樹
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760185/
关键词：
スーパーオキシドジスムターゼ活性酸素魚類皮膚

项目摘要

1.ヒラメ皮膚スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)の精製:ヒラメ皮膚黒色部から調製した抽出液をDEAE-およびSP-Toyopearlによるイオン交換クロマトグラフィーに供することで2本存在するCu,Zn-SODアイソマ-の内の一方を電気泳動的に均一に精製することに成功した。2.精製SODの分子的性質:(1)本SODをSuperose 12HRによるFPLCで分析したところ、その分子量は約65000Daと推定された。さらに、変性剤存在下の電気泳動(SDS/PAGE)によりサブユニット組成を分析したところ、そのサブユニットは約16000 Daであることが明らかとなった。さらに、サブユニットへの解離は還元剤(2-メルカプトエタノール)の有無によらず起こった。すなわち、本SDOはネイティブな状態ではサブユニット4個からなる4量体構造をとっており、そのサブユニット間の結合はジスルフィド(S-S)結合によるのではなく非共有結合によるものと思われる。一方、市販のウシ赤血球Cu,Zn-SODを同様に分析したところ、それは約16000 Daのサブユニット2個からになる2量体でありその構造の維持にはS-S結合が関与していることが示され、これは既往の報告と極めて良く一致した。(2)等電点電気泳動により本SODの等電点は約6.3と求められた。一般に哺乳類SODの等電点はほとんどが酸性であることが報告されており、中性域に等電点を持つ本SODは珍しいといえる。3.精製SODの免疫化学的性質:(1)ポリクローナル抗体の作製:ウシ赤血球SODを家兎に免疫し、約2ヶ月間かけて抗体を作製することに成功した。(2)精製SODとウシSODの固相法酵素イムノアッセイ(ELISA):作製した抗体はウシSODと高い抗原抗体反応を示したが、一方、精製SODとは全く反応しないことが明らかとなった。すなわち、本SODとウシSODはその抗原認識部位が異なるものと推察された。4.以上のようにヒラメ皮膚には分子化学的に極めてユニークなSODが存在することが明らかとなり、それは免疫化学的に他生物種のSODとも異なることが示されたのは本研究が初めてであると思われる。

1。纯化比目皮肤超氧化物歧化酶（SOD）的纯化：使用DEAE-和SPOYOPEARL将从比目鱼皮肤的黑色部分制备到离子交换色谱法，成功地纯电纯化了两个Cu和Zn-Sod异构体之一。 2。纯化的SOD的分子特性：（1）使用Superose 12hr通过FPLC分析此SOD，估计其分子量约为65,000 DA。此外，在存在变性剂的情况下，通过电泳（SDS/PAGE）分析了亚基组成，并发现亚基约为16,000 da。此外，在有或没有还原剂（2-甲醇）的情况下，发生在亚基中的解离。换句话说，在本地状态下，该SDO具有四个亚基的四聚体结构，看来这些亚基之间的键不是二硫化物（S-S）键，而是由于非共价键。同时，对市售牛红细胞Cu和Zn-Sod的类似分析表明，它们是由大约16,000 DA的两个亚基组成的二聚体，S-S结合涉及维持其结构，这与先前的报告非常吻合。（2）通过等电聚焦确定该SOD的等电点约为6.3。据报道，大多数哺乳动物草皮的等电点通常都是酸性的，并且在中性范围内具有等电点的SOD很少见。 3。纯化的SOD的免疫化学特性：（1）多克隆抗体的制备：用牛红细胞SOD对兔进行免疫，并在大约2个月内成功产生抗体。（2）纯化的SOD和牛SOD的固相免疫测定法（ELISA）：产生的抗体与牛SOD表现出高抗原抗体反应，但据显示，它根本没有与纯化的SOD反应。换句话说，据估计，该草皮和牛草皮具有不同的抗原识别位点。 4。如上所述，已经揭示了比目鱼皮中有极其独特的分子化学草皮，这项研究似乎是第一次证明它与其他物种中的人具有免疫化学上的不同。