魚類皮膚スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)分子の異質性

鱼皮超氧化物歧化酶（SOD）分子的异质性

• 批准号: 06760185
• 负责人: 中野 俊樹
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760185/
• 关键词: スーパーオキシドジスムターゼ; 活性酸素; 魚類; 皮膚

1.ヒラメ皮膚スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)の精製:ヒラメ皮膚黒色部から調製した抽出液をDEAE-およびSP-Toyopearlによるイオン交換クロマトグラフィーに供することで2本存在するCu,Zn-SODアイソマ-の内の一方を電気泳動的に均一に精製することに成功した。2.精製SODの分子的性質:(1)本SODをSuperose 12HRによるFPLCで分析したところ、その分子量は約65000Daと推定された。さらに、変性剤存在下の電気泳動(SDS/PAGE)によりサブユニット組成を分析したところ、そのサブユニットは約16000 Daであることが明らかとなった。さらに、サブユニットへの解離は還元剤(2-メルカプトエタノール)の有無によらず起こった。すなわち、本SDOはネイティブな状態ではサブユニット4個からなる4量体構造をとっており、そのサブユニット間の結合はジスルフィド(S-S)結合によるのではなく非共有結合によるものと思われる。一方、市販のウシ赤血球Cu,Zn-SODを同様に分析したところ、それは約16000 Daのサブユニット2個からになる2量体でありその構造の維持にはS-S結合が関与していることが示され、これは既往の報告と極めて良く一致した。(2)等電点電気泳動により本SODの等電点は約6.3と求められた。一般に哺乳類SODの等電点はほとんどが酸性であることが報告されており、中性域に等電点を持つ本SODは珍しいといえる。3.精製SODの免疫化学的性質:(1)ポリクローナル抗体の作製:ウシ赤血球SODを家兎に免疫し、約2ヶ月間かけて抗体を作製することに成功した。(2)精製SODとウシSODの固相法酵素イムノアッセイ(ELISA):作製した抗体はウシSODと高い抗原抗体反応を示したが、一方、精製SODとは全く反応しないことが明らかとなった。すなわち、本SODとウシSODはその抗原認識部位が異なるものと推察された。4.以上のようにヒラメ皮膚には分子化学的に極めてユニークなSODが存在することが明らかとなり、それは免疫化学的に他生物種のSODとも異なることが示されたのは本研究が初めてであると思われる。

1. The purification of SOD: The purification of SOD was successfully carried out in the preparation of DEAE-and SP-Toyopearl extracts from the black part of the skin. 2. Molecular properties of purified SOD:(1) FPLC analysis of SOD showed that its molecular weight was about 65000Da Electrophoresis (SDS/PAGE) in the presence of different substances was analyzed. The composition was about 16000 Da.さらに、サブユニットへの离解は还元剤(2-メルカプトエタノール)の有无によらず起こった。In this case, the state of SDO can be divided into four parts: the structure of four parts, the combination of two parts, and the combination of two parts. The analysis of Cu,Zn-SOD in erythrocytes of a square and a market is consistent with that of previous reports. (2)The isoelectric point of SOD is about 6.3. In general, the isoelectric point of mammalian SOD is acidic, neutral and stable. 3. Immunochemical properties of purified SOD:(1) Preparation of antibodies against purified SOD: Immunization of purified SOD was carried out in about 2 months. (2)Refined SOD and SOD Solid Phase Enzyme (ELISA): Preparation of Antibodies Against SOD and Antigen Antibodies Against SOD This SOD may be used to detect different antigen recognition sites. 4. The above results show that SOD exists in the skin and is related to molecular chemistry.

项目成果

T.Nakano,M.Sato,and M.Takeuchi: "Unique molecular properties of superoxide dismutase from teleost fish skin." FEBS Letters. (in press). (1995)

T.Nakano、M.Sato 和 M.Takeuchi：“来自硬骨鱼皮的超氧化物歧化酶的独特分子特性。”