急性GVHD大腸病変におけるapoptosisとサイトカインの分子・病理学的解析

急性GVHD结肠病变细胞凋亡和细胞因子的分子和病​​理分析

• 批准号: 06770175
• 负责人: 鈴木 美奈子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770175/
• 关键词: 急性GVHD; apoptosis; DNA fragmentation; TUNEL

副組織適合遺伝子のみが異なるマウス間で同種骨髄移植(BMT)を行い、致死的な急性graft-versus-host disease(GVHD)を惹起しBMT後28日目迄の大腸病変を探索した。(材料および方法)レシピエントに放射線照射後、骨髄細胞と脾細胞をそれぞれ1.0×10^7個ずつ投与したものをGVHD群とし、骨髄細胞1.0×10^7のみを投与したものをBM群とした。大腸腺上皮傷害とapoptosisの関わりを見る為にレシピエントマウスを経時的に屠殺し、摘出した大腸組織をホルマリン固定後、パラフィン包埋しapoptosisの指標となるDNA fragmentationの局在をnick end labeling(TUNEL)法を用いて組織切片上で明らかにした。(結果1)GVHD群では大腸腺上皮細胞間に浸潤する細胞は、BMT後12-17日目にピークに達し、その後減少するが、これとほぼ一致してnick end陽性細胞もBMT後12-17日目をピークに出現する。大腸腺上皮傷害の程度もこれらの細胞の出現と比較的一致している。リンパ球、あるいは腺上皮細胞にnick end陽性所見がみられ、apoptotic bodyやapoptosisと思われる細胞にも陽性所見が認められた。一方BM群では、GVHD群と比較してピーク時に於いては明らかにnick end陽性細胞は少なく腺上皮傷害も殆ど見られなかった。(結果2)サイトカインについての検索は、IL-1αについて行った。PLP固定後、OCTコンパウンド包埋し凍結切片を作製し、抗IL-1α抗体で染色したところ、抗体がポリクローナルなのでバックグランドが出てしまい、あまり良い染色結果は得られなかった。現在改良を加えて検討中である。(結果3)更にIL-1αのgeneをPCRにて増幅し、in situ hybridizationを行う為にプローブを作製している段階である。

The development of acute graft-versus-host disease(GVHD), a fatal disease, has been explored since 28 days after BMT. After irradiation, bone marrow cells and spleen cells were divided into 1.0×10^7 cells and 1.0×10^7 cells. Colorectal epithelial injury and apoptosis were detected by nick end labeling(TUNEL). (Results 1)GVHD group was found to be infiltrated into epithelial cells of colorectal glands at 12 - 17 days after BMT. The degree of damage to the epithelium of large intestine is consistent with the appearance of cells. The cells in the glandular epithelium are identified by nick end. The apoptotic cells are identified by nick end. A group of BM, GVHD groups were compared with each other. (Result 2) IL-1α may be detected by IL-1α. After PLP fixation, OCT was embedded and frozen sections were prepared. Anti-IL-1α antibody staining was performed. Anti-IL-1 α antibody staining results were obtained. Now add. (Result 3) IL-1α gene amplification, in situ hybridization, in the middle stage of the process.

项目成果

Minako Suzuki: "APOPTOSIS OF MURINE LARGE INTESTINE IN ACUTE GRAFT-VERSUS-HOST DISEASE AFTER ALLOGENEIC BONE MARROW TRANSPLANTATION ACROSS MINOR HISTOCOMPATIBILITY BARRIERS" TRANSPLANTATION. 57. 1284-1287 (1994)

Minako Suzuki：“跨次要组织相容性障碍的同种异体骨髓移植后急性移植物抗宿主病中小鼠大肠的细胞凋亡”。