急性GVHD大腸上皮内Mn-SODの発現様相の病理学的解析及び傷害機構の解明

急性GVHD结肠上皮内Mn-SOD表达模式的病理分析及损伤机制的阐明

• 批准号: 07770170
• 负责人: 鈴木 美奈子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770170/
• 关键词: 急性GVHD; apoptosis; Mn-SOD; in situ hybridization; nick end labeling

副組織適合遺伝子のみが異なるマウス間で同種骨髄移植(BMT)を行い、致死的な急性GVHDを惹起しBMT後28日目までの大腸病変とapoptosis、更にMn-SODの発現との関わりについて解析した。(材料及び方法)レシピエントに放射線照射後、骨髄細胞と脾細胞をそれぞれ1.0×10^7個ずつ投与したものをGVHD群とし、骨髄細胞1.0×10^7個のみを投与したものBM群とした。大腸腺上皮傷害とapoptosisの関わりをみる為にレシピエントマウスを経時的に屠殺し、摘出した大腸組織を一部ホルマリン固定、パラフィン包埋後、nick end labeling染色、一部をPLP固定、OCTコンパウンド包埋後、Mn-SOD染色を行った。一方マウスのMn-SODmRNAに対する合成オリゴヌクレオチドプローブを作製し、in situ hybridizationを行った。(結果1)GVHD群では大腸腺上皮細胞間の浸潤細胞のピーク、また腺上皮傷害の程度に一致してnick end陽性所見がみられた。一方、BM群では、GVHD群と比較してピーク時において明らかにnick end陽性細胞は少なく腺上皮傷害もほとんどみられなかった。(結果2)Mn-SODの免疫組織化学の染色においては、GVHD群とBM群では陽性像が異なっており、その意義について現在検討中である。(結果3)Mn-SODのmRNAに対するビオチン化プローブにてin situ hybridizationを行ったが、良い結果が得られていない。原因としては、(1)Mn-SODのmRNAが発現していない、(2)用いたプローブが良くない、(3)RNaseにより目的mRNAが分解された、ことなどが考えられる。現在プローブを変えて検討中である。更に組織傷害が少ない、あるいは起こっていない臓器においても検討が必要である。

Acute GVHD caused by accessory tissues is suitable for bone allograft transplantation (BMT), and the occurrence of apoptosis and Mn-SOD in colorectal diseases 28 days after BMT is analyzed. (Materials and methods) After irradiation, bone marrow cells and spleen cells were divided into 1.0×10^7 cells and 1.0×10^7 cells. Colorectal gland epithelial injury and apoptosis related to the preparation of a large intestine tissue, extraction of large intestine tissue, part of the preparation fixed, embedded, nick end labeling staining, part of PLP fixed, OCT embedded, Mn-SOD staining. The synthesis of Mn-SOD mRNA is controlled by situ hybridization. (Results 1) The GVHD group was similar to the positive nick end in the degree of damage to the glandular epithelium and the infiltrating cells among the glandular epithelium. A side, BM group and GVHD group were compared. The positive cells were less glandular epithelial injury. (Results 2) Immunohistochemical staining of Mn-SOD showed positive staining for GVHD group and BM group. (Result 3)Mn-SOD mRNA expression was detected in situ hybridization, and good results were obtained. The reasons for this are: (1)Mn-SOD mRNA is expressed;(2) it is used in a good way;(3)RNase is used to decompose the target mRNA; and (4) Mn-SOD mRNA is expressed in a bad way. Now you've got to go. More tissue damage, less damage,