ラット肝培養伊東細胞のヒアルロン酸合成に及ぼすエタノールとその代謝産物の影響

乙醇及其代谢物对培养大鼠肝Ito细胞透明质酸合成的影响

• 批准号: 06770407
• 负责人: 浦島 左千夫
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kanazawa Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770407/
• 关键词: アルコール性肝障害; ヒアルロン酸; 伊東細胞

アルコール(AL)性肝障害では、血中ヒアルロン酸(HY)値が高値を示す例が少なくないが、その機序として類洞内皮細胞でのHYの分解能の低下、ないしはFat storing cell(FSC)によるHYの合成亢進の可能性が考えられる。そこで、正常および慢性AL投与ラット肝より分離・培養したFSCのHY合成能について検討することとした。1.FSCの分離・培養・正常および慢性AL投与Wistar系雄性ラットからTsutsumiらの方法に従ってFSCを分離・培養した。すなわち、ラット肝をプロナーゼとコラゲナーゼで潅流後、メトリザマイドを用いた比重遠心法により、FSCを分離・採取し、Dulbecco's MEMを用い、37℃、5%炭酸ガス下で培養した。なお、培養FSCの同定はデスミン染色によって確認した。伊東細胞は培養開始3日目より細胞数が増加し始め、9日目以降は定常状態を示した。2.HY濃度の測定:HY結合蛋白(HABP)を用いたSandwich Binding Protein Assay(SBPA)法により測定した。すなわち、ポリスチレンビーズ上に固相化したHABPと回収した培養液とを反応させた後、ビオチン化HABPを加え、さらにペルオキシダーゼ標識化アビジンを結合させ、o-phenylene-diamineを加えて発色後、492nmにおける吸光度を測定し、標準曲線からHY濃度を測定した。なお、FCS加Dulbecco's MEMに含まれているHY濃度を測定し、検体の濃度を補正した。3.正常ラット肝由来培養FSCにおけるHY合成能:FSCの増殖にともなうHYの経時的推移についてみると、培養3日目 254±54mg/dl、5日目 846±43mg/dl、9日目 1026±86mg/dおよび、12日目 1580±120mg/dlであった。これらの結果から、SABP法によるHYの測定は培養3日目から可能であり、またFSCの増殖とともに、HY産生の増加することが明らかとなった。4.慢性AL投与ラット肝由来培養FSCにおけるHY合成能:培養3と5日目のHY濃度は、287±78mg/dl、912±122mg/dlであり、いずれも対応する正常ラットのHY濃度より高い傾向を示し、培養9日目では1500mg/dl以上、培養120日目では2000mg/dl以上で、正常ラットより明らかに高い値であった。これらの実験結果から、慢性AL投与が培養FSCのHY合成能を促進することが推定された。

The high value of HY in the blood and liver of AL patients indicates that the mechanism of HY decomposition in cavity-like endothelial cells is low, and the possibility of HY synthesis in Fat storage cells (FSC) is high. In addition, normal and chronic AL can be isolated and cultured. 1. Isolation and culture of FSC from normal and chronic AL cells and Wistar male cells After the flow, the mixture was separated by gravity centrifugation, FSC was isolated, Dulbecco's MEM was cultured at 37℃ and 5% carbon acid. FSC culture was confirmed by staining. The number of Ito cells increased 3 days after the start of culture, and decreased to a steady state 9 days later. 2. Determination of HY concentration:HY binding protein (HABP) was determined by Sandwich Binding Protein Assay(SBPA). After solid-phase HABP and culture solution were added, the HABP was identified and the absorbance was measured at 492nm after o-phenylene-diamine was added. The standard curve was measured. FCS plus Dulbecco's MEM contains HY concentration determination and correction of HY concentration 3. HY synthesis ability of FSC in normal liver culture:FSC growth and HY growth time lapse, culture 3 days 254±54mg/dl, 5 days 846±43mg/dl, 9 days 1026±86mg/d, 12 days 1580±120mg/dl. The results of SABP method are as follows: 4. HY synthesis ability of FSC cultured in liver with chronic AL administration: HY concentration at 3 and 5 days of culture was 287±78mg/dl, 912±122mg/dl, medium and high, HY concentration at 9 and 120 days of culture was 1500mg/dl or higher, and HY concentration at normal level was high. The results showed that chronic AL administration could promote the synthesis of FSC and HY.