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マグネシウムとヒト血管内皮細胞刺激応答の変化について-遺伝子発現との関連-

关于镁的变化与人血管内皮细胞刺激反应-与基因表达的关系-

基本信息

批准号：
06770505
负责人：
白井馨
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770505/
关键词：
prostacy clin HUVEC magnesium phospholipase A_2 PGHS competitive PCR

项目摘要

ヒト臍帯静脈から分離培養した血管内皮細胞を用いてbradykinin(BK),interleukinl-α(IL-lα),thrombin(Th)およびcaptoprilなどの種々の脈管作動物質がPGI_2産生量の15分から180分までの経時的変化に与える影響を検討し,またBCECF/AMをもちいた細胞内pHの測定系,fura-2/AMを用いた細胞質内遊離Ca^<++>濃度への測定系およびMag-fura-2/AMを用いた細胞内遊離Mg^<++>濃度およびIP_3量などの測定系の影響について検討した。また同時に遺伝子工学的手法(competitive PCR法)によりPGI_2産生に関連するphospholipase A_2(PLA_2),PGHSなどの遺伝子のmRNA発現量におよぼす影響を検討した。その結果PGI_2産生量はBKおよびThにより添加直後から増加したが,IL-lαは添加直後は変化なく,添加60分後から増加した。また細胞内pHはBK,Thによりアルカリ化したが,IL-lαでは変化無く,細胞質内遊離Ca^<++>濃度はBK,Thにより増加したが,IL-lαでは変化を認め無かった。細胞内遊離Mg^<++>濃度はBK,ThおよびIL-lαにより増加したが,IP_3産生量はBKならびにThにより増加したが,IL-lαにより変化しなかった。この際PLA_2,PGHSのmRNAの発現量はBKおよびThにより添加直後から増加したが,IL-lαにより添加直後は変化を認めなかったが,添加60分後より増加することが判明した。従ってIL-lαにより観察された添加60分後からのPGI_2産生亢進作用は主として関連する酵素のmRNAの誘導による酵素量の増加による可能性が考えられた。また内皮細胞のPGI_2産生調節機序は種々の脈管作動物質によって異なり細胞内pH,細胞質内遊離Ca^<++>濃度,細胞内遊離Mg^<++>濃度,IP_3産生量あるいは遺伝子のmRNA発現などによって複雑に制御されていることが判明した。

The vascular endothelial cells were isolated and cultured from umbilical vein. The vascular motile substances produced by bradykinin(BK), interleukin-α(IL-1 α),thrombin(Th) and captopril were studied. The changes of PGI_2 production and its effects on the intracellular pH were investigated. The effect of Fura-2/AM on the determination of intracellular free Ca^<++> concentration and the determination of intracellular free Mg^<++> concentration and IP_3 concentration was discussed. To investigate the effect of competitive PCR on the expression of phospholipase A_2(PLA_2) and PGHS mRNA in PGI_2 production. As a result, PGI_2 production increased after BK was added,IL-lα increased after 60 minutes was added. The intracellular pH of BK,Th, and IL-1 α changed, and the intracellular free Ca^<++> concentration of BK,Th, and IL-1 α increased. Intracellular free Mg^++> concentration increased with BK,Th and IL-lα, and IP_3 production increased with BK, Th and IL-lα. The mRNA expression of PLA_2 and PGHS increased after adding BK and Th, and increased after adding IL-1 α. The possibility that PGI_2 is hyperactive after 60 minutes of IL-1 gene addition is examined. The regulation mechanism of PGI_2 production in endothelial cells was identified, including intracellular pH, intracellular free Ca^<++> concentration, intracellular free Mg^<++> concentration, IP_3 production, and mRNA expression in endothelial cells.