皮膚に存在するヒスタミン感受性C線維の伝達物質

皮肤中存在对组胺敏感的 C 纤维传输器

• 批准号: 06770630
• 负责人: 丸山 隆児
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770630/
• 关键词: かゆみ; 化学受容線維; 脊髄後角ニューロン; Fos蛋白; ラット

かゆみ成立の神経学的機序を解析するため皮膚における化学受容線維の伝達物質を検索した。まず末梢からの刺激伝達による脊髄後角ニューロンでのFos蛋白発現を確認するため,ペントバルビタール麻酔下でラットの後肢足底に5%ホルマリン0.1mlを局注し,その2時間後,エーテル麻酔下に0.1Mヘパリン加リン酸緩衝液で潅流した後,Zamboni液で潅流固定を行い脊髄を摘出した。摘出した脊髄はさらに24時間浸漬固定し,洗浄して凍結し,厚さ20μmに薄切して,Fos蛋白特異的な抗体を用いてavidin-biotin complex methodによる免疫染色を行った。発色にはdiaminopenzidineを用いた。その結果,当初用いた2種類の抗体(Oncogene Science社ウサギポリクローナル抗Fos蛋白抗体(Ab-2),Cambridge Research Biochemicals社ヒツジポリクローナル抗Fos蛋白抗体(OA-11-825))では脊髄後角ニューロンにおけるFos蛋白の発現は検出することができず,Cambridge Research Biochemicals社ヒツジポリクローナル抗Fos蛋白抗体(OA-11-824)でのみFos蛋白の発現を確認することができた。そこでこの抗体を用いて,以下の実験を行った。ラットの後肢前面を剃毛し,その24時間後にペントバルビタール麻酔下で同部位に500mg/mlの濃度でヒスタミンを溶解した生理食塩水を塗布し,プラスチック性のピペットチップで軽く20回掻破を行った。処置の2時間後に上記方法で潅流固定し摘出した脊髄を凍結切片とし免疫染色を行った。その結果シスタミン刺激によっても脊髄後角ニューロンにFos蛋白が発現することを確認した。しかし,ホルマリンによる刺激と比較してFos蛋白を発現する細胞はより少数で,ほぼ後角のI層に限局して見られた。現在,ヒスタミンアンタゴニストを投与してこれらのニューロンにおけるFos蛋白発現の変化を検討中である。

为了分析瘙痒的神经系统机制，我们搜索了皮肤中化学感受器纤维的发射器。 First, to confirm the expression of Fos protein in dorsal horn neurons of spinal cord stimulation by peripheral stimulation, 0.1 ml of 5% formalin was locally injected into the sole of the hind legs of rats under pentobarbital anesthesia, and 2 hours later, the mixture was perfused with 0.1M heparinized phosphate buffer under ether anesthesia, and then perfused with Zamboni solution to remove the 脊髓。将切除的脊髓进一步浸入并固定24小时，洗涤和冷冻，切成20μm的厚度，并使用Avidin-Biotin复合方法使用FOS蛋白质特异性抗体进行免疫染色。二氨基苯胺用于颜色开发。 As a result, the initial two antibodies (Oncogene Science rabbit polyclonal anti-Fos protein antibody (Ab-2) and Cambridge Research Biochemicals sheep polyclonal anti-Fos protein antibody (OA-11-825)) were unable to detect the expression of Fos protein in dorsal horn neurons, and only Cambridge Research Biochemicals sheep polyclonal anti-Fos protein可以证实抗体（OA-11-824）。因此，使用该抗体进行了以下实验。将大鼠的后腿的前侧剃光，24小时后在五边形麻醉下，将组胺以500 mg/mL的浓度溶于同一部位，并用塑料液吹笛尖端将所得的混合物轻轻地刮擦20次。治疗两个小时后，使用上述方法将脊髓灌注并切除，并进行冷冻和免疫染色。结果，即使在进行2甲胺刺激时，也证实了FOS蛋白在脊髓的背角神经元中表达。但是，与福尔马林刺激相比，表达FOS蛋白的细胞较少，被认为位于背喇叭的I层。当前，正在研究这些神经元中FOS蛋白表达的变化通过给药组胺拮抗剂进行研究。