皮膚に存在するヒスタミン感受性C線維の伝達物質

皮肤中存在对组胺敏感的 C 纤维传输器

• 批准号: 06770630
• 负责人: 丸山 隆児
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770630/
• 关键词: かゆみ; 化学受容線維; 脊髄後角ニューロン; Fos蛋白; ラット

かゆみ成立の神経学的機序を解析するため皮膚における化学受容線維の伝達物質を検索した。まず末梢からの刺激伝達による脊髄後角ニューロンでのFos蛋白発現を確認するため,ペントバルビタール麻酔下でラットの後肢足底に5%ホルマリン0.1mlを局注し,その2時間後,エーテル麻酔下に0.1Mヘパリン加リン酸緩衝液で潅流した後,Zamboni液で潅流固定を行い脊髄を摘出した。摘出した脊髄はさらに24時間浸漬固定し,洗浄して凍結し,厚さ20μmに薄切して,Fos蛋白特異的な抗体を用いてavidin-biotin complex methodによる免疫染色を行った。発色にはdiaminopenzidineを用いた。その結果,当初用いた2種類の抗体(Oncogene Science社ウサギポリクローナル抗Fos蛋白抗体(Ab-2),Cambridge Research Biochemicals社ヒツジポリクローナル抗Fos蛋白抗体(OA-11-825))では脊髄後角ニューロンにおけるFos蛋白の発現は検出することができず,Cambridge Research Biochemicals社ヒツジポリクローナル抗Fos蛋白抗体(OA-11-824)でのみFos蛋白の発現を確認することができた。そこでこの抗体を用いて,以下の実験を行った。ラットの後肢前面を剃毛し,その24時間後にペントバルビタール麻酔下で同部位に500mg/mlの濃度でヒスタミンを溶解した生理食塩水を塗布し,プラスチック性のピペットチップで軽く20回掻破を行った。処置の2時間後に上記方法で潅流固定し摘出した脊髄を凍結切片とし免疫染色を行った。その結果シスタミン刺激によっても脊髄後角ニューロンにFos蛋白が発現することを確認した。しかし,ホルマリンによる刺激と比較してFos蛋白を発現する細胞はより少数で,ほぼ後角のI層に限局して見られた。現在,ヒスタミンアンタゴニストを投与してこれらのニューロンにおけるFos蛋白発現の変化を検討中である。

The order of the establishment of theology is analyzed in terms of chemical tolerance, chemical tolerance, and chemical tolerance. The Fos protein in the dorsal corner of the spinal cord was confirmed by peripheral stimulation, and 5% of the foot of the hind limb was detected by local injection of 0.1ml. After 2 o'clock, the spinal cord was removed by the flow of acid solution at 0.1m under the anaesthesia, and the spinal cord was fixed by Zamboni flow. After 24 hours of immersion and fixation, the spinal cord was washed and cut thinly with a thickness of 20 μ m. The specific antibody against Fos protein was stained with avidin-biotin complex method immunostaining. Color, diaminopenzidine, use color. The results showed that the antibody against Fos protein (Ab-2) and the antibody against Fos protein (OA-11-825) in the back of the spine were detected by using anti-Fos antibody (OA-11-825) and anti-Fos protein antibody (OA-11-825). The Cambridge Research Biochemicals community confirmed the presence of anti-Fos protein antibodies (OA-11-824) and Fos protein antibodies. Please use the antibody, and the following will be fine. After 24 hours of shaving, the front of the hind legs should be shaved. After 24 hours, the 500mg/ml in the same part of the body would be dissolved in the same part of the body. The water cloths would be dissolved, and the water cloths would be broken for 20 times. After 2 hours, the method of flow fixation was used to extract the spinal cord, and the sections were stained with immunostaining. The results showed that the Fos protein was detected in the back corner of the spinal cord after stimulation. In the back corner, I would like to limit the number of people in the back corner. I would like to know that there is a small number of cells in Fos protein. Now, we need to know that there is a problem in the development of Fos protein.