モデル動物を用いた痒みに対する知覚過敏の検討

使用模型动物检查瘙痒过敏症

• 批准号: 09770613
• 负责人: 丸山 隆児
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770613/
• 关键词: hyperinnervation; c-fos; 脊髄後角ニューロン; 痒み; 知覚過敏

人為的にhyperinnervationを惹起した皮膚における痒み感受性の検討剃毛したメスSprague-Dawley種ラット後肢前面に1%活性型ビタミンD溶液,アセトン,生理食塩水を15日間連日外用した。16日目にそれぞれの外用部皮膚を生検し,型通りホルマリン固定,パラフィン包埋し,厚さ5ミクロンの切片を作成して抗PGP9.5ポリクローナル抗体を用いたsABC法による免疫染色を行った。染色された表皮真皮境界部に存在する末梢神経線維の密度をdigital analyzerを用いて解析した結果,アセトン外用群では対照とした生理食塩水外用群(対照)に比して統計学的に有意な末梢神経線維の増生を認めた。しかし,活性型ビタミンD溶液外用群では対照と比して明らかな神経線維の増生は認められなかった。そこで,メスSprague-Dawley種ラット後肢前面にアセトンを15日間連日外用し,同部位にhyperinnervationを生じたラットを作成した。対照として生理食塩水を同様に15日間連日外用したラットを用いた。外用終了から2日後,0.1%,0.3%,1%のヒスタミン水溶液を処置部にそれぞれ塗付し、その上を軽く掻破して,痒み刺激を与えた。刺激2時間後,エーテル麻酔下にZamboni液を用いて被験ラットを潅流固定して脊髄を摘出した。摘出した脊髄は同固定液にてさらに2日間浸漬固定した後,腰髄部をクリオスタットで厚さ20ミクロンの凍結切片とした。Fos蛋白に対するポリクローナル抗体を用いてsABC法によりこの切片を免疫染色し,染色された脊髄後角ニューロンを計数し,アセトン処置群と対照群それぞれの陽性細胞数を比較した。その結果,アセトン処置群で陽性細胞数の増加する傾向が認められたが,統計学的な有意差は得られなかった。現在,被験ラット数を増やして統計学的な有意差が得られるかどうか検討中である。

检查引起人为过度感染的皮肤瘙痒敏感性。 1％活性维生素D溶液，丙酮和盐水局部施用在剃光的雌性Sprague-Dawley大鼠后肢的前部15天。在第16天，将每种外部皮肤进行活检，并使用抗PGP9.5多克隆抗体制备福尔马林固定，石蜡和5微米厚的切片，并使用SABC方法进行免疫染色。使用数字分析仪分析了在用表皮染色的表皮边界处存在的周围神经纤维的密度，与生理学的外部组相比，丙酮外部组表现出外周神经纤维的统计学显着增加（对照）。但是，在外部使用活性维生素D溶液的组中，与对照组相比，没有观察到神经纤维明显增加。因此，将丙酮局部应用于雌性Sprague-Dawley大鼠的后肢前部15天，并准备在同一部位过度接触的大鼠。作为对照，将大鼠以相同的方式用于局部盐水15天。局部应用结束后两天，将0.1％，0.3％和1％的组胺水溶液溶液应用于治疗部分，并将顶部轻轻刮擦以使其具有刺激性的感觉。刺激两个小时后，将测试大鼠灌注并用zamboni液在乙醚麻醉下固定以去除脊髓。将切除的脊髓浸入同一固定剂中，再浸入2天，然后将腰绳用低温恒温器冷冻到20微米的厚度。使用针对FOS蛋白的多克隆抗体对切片进行免疫染色，并计数染色的背角神经元，并比较了丙酮处理和对照组中阳性细胞的数量。结果表明，丙酮处理组的阳性细胞数量增加，但没有获得统计学上的显着差异。目前，我们正在考虑是否可以通过增加测试大鼠的数量来获得统计学上的显着差异。