形質転換雄性配偶子による受精を経由した形質転換植物作出の試み

尝试通过用转化的雄配子受精来创造转化植物

• 批准号: 06856002
• 负责人: 久保山 勉
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06856002/
• 关键词: 遺伝子導入; パーティクルガン; 形質転換; 花粉; 受精; タバコ

花粉にパーティクルガンによって遺伝子を導入した後,受粉を行い,形質転換体を作成することを目標に実験を行った.一回の受粉で多数の種子をつける植物が有利だと考え,タバコを実験に用いた.パーティクルガンの条件設定にはpBI211を用い,トランジェントな発現をGUS活性によって検出した.さらに,形質転換体を得る実験ではhygromycin phosphotransferaseをセレクションマーカーに持つプラスミドp35s-GUS-HPT2-KSを(株)三井東圧ライフサイエンス研究所より分譲を受けた.パーティクルガンはdu PontのBiolystic,Helium-Driven PDS-1000/He systemを使用した.採取した花粉は,花粉発芽培地に懸濁し,吸引濾過によってニトロセルロース膜に載せた.一回あたり0.5mgの金粒子に1μgのDNAを処理してbomberdmentを行った.圧力は900psi,1100psi,1300psiの3通り,金粒子の大きさは1.0μmと1.6μmの2通りで条件設定を行った.その結果金粒子は1.6μm,圧力は1300psiで最も良い結果が得られた.しかし,現在のところ,GUS活性が確認できた花粉はおよそ10,000個に1つなので,2,000個種をつけるタバコでさえ,一回の受粉で受精できる確立は5分の1という低い確率になる.さらに,金粒子を打ち込まれた花粉はそうでない花粉に比べて活力が低く,受精までの競争で負ける可能性が高いのではないかと考えるとさらに確率が低くなると思われる.また,成熟した花粉に遺伝子を導入しているため,受精後細胞分裂を開始するまで導入した遺伝子が核のゲノムに取り込まれないので,かなり高い確率で、花粉に遺伝子が導入されることが望まれる.その点で,パーティクルガンを利用する場合には技術的に困難ではないかと思われる.

After the pollen is introduced, the pollen is pollinated, and the shape of the pollen is changed. A round of pollinated most of the seed. PBI211 is used in the condition setting of " In addition, the morphological transformation of the protein has been successfully carried out, and the hygromycin phosphotransferase has been identified by the research institute of Mitsui Higashi. The Biolytic,Helium-Driven PDS-1000/He system is used. Pollen germination culture is suspended, and the membrane is carried by suction and filtration. 1μg of DNA from 0.5mg of gold particles was processed by bombardment. Pressure is 900psi,1100psi,1300psi and 3 channels, gold particle size is 1.0μm and 1.6μm and 2 channels. The results of the gold particles are 1.6μm, the pressure is 1300psi, and the best results are obtained. GUS activity was confirmed in 10,000 pollen grains, 1 in 2,000 species, and 1 in 5 pollen grains. The pollen activity is lower than that of the pollen, and the probability of fertilization is higher than that of competition. The introduction of mature pollen fragments into the cell after fertilization begins. The introduction of pollen fragments into the cell after fertilization begins. The introduction of pollen fragments into the cell after fertilization begins. In the case of technical difficulties, it is difficult to think about how to make use of the technology.