プロトプラスト培養を利用したカキの形質転換体作出に関する基礎的研究

利用原生质体培养创建牡蛎转化体的基础研究

• 批准号: 06856005
• 负责人: 田村 美穂子
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06856005/
• 关键词: エレクトロポレーション; カキ; 形質転換; トランジェントアッセイ

カキの形質転換体の作出方法としてエレクトロポレーションによる直接遺伝子導入法を用いた.供試材料には‘次郎'のカルスより単離したプロトプラストを用い,レ-ポーター遺伝子としてGUS遺伝子を導入した.この際,遺伝子導入の最適条件をエレクトロポレーション24時間後の一過性発現を調査するトランジェントアッセイにより検討した.検討項目としてプロトプラスト懸濁液中の塩化カルシウム濃度,プラスミド添加濃度,印加電圧,キャパシタンス,及びエレクトロポレーション前の温度処理効果を調査し,それぞれ最適条件を得ると同時に至適タイムコンスタントが明らかになった.またトランジェントアッセイと同時にエレクトロポレーション直後の細胞生存率をFDA染色によって調べ,GUS活性に生存率を加味することでカキにおける遺伝子導入の最適条件を決定することができた.この条件で処理したプロトプラストをアガロースビーズ培養した場合,無処理区に比べ生育が著しく劣ったため,ナ-ス培養(無処理区のアガロースブロックを使用)を試み,良好な結果が得られている.今後これらの培養を続け,形質転換カルスを選抜し,植物体再生を試みる予定である。

The method of making the physical transformation of the protein is used in the direct gene introduction method. The test material was introduced into the culture medium of the 'Jilang' gene and the GUS gene. At this time, the optimal conditions for gene introduction were investigated. To investigate the effects of temperature treatment before the suspension, the optimum conditions were obtained and the optimum conditions were obtained. The optimal conditions for gene introduction were determined by FDA staining,GUS activity, and cell viability. In this case, no treatment zone is better than no treatment zone in fertility, and no treatment zone is better than no treatment zone. In the future, the cultivation process, the quality change, the selection process, the plant regeneration process and the predetermined time will be determined.