イネ萎縮ウイルスのヨコバイ細胞感染性を支配するウイルス因子の同定

控制水稻矮缩病毒在叶蝉细胞中感染的病毒因子的鉴定

• 批准号: 06856008
• 负责人: 鈴木 信弘
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Akita Prefectural College of Agriculture
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06856008/
• 关键词: イネ萎縮ウイルス; 虫媒伝染性; ウイルス構造蛋白質

1)他の植物レオウイルスで得られた過去の結果と予備実験の結果から、S2、S5がウイルス粒子表面に存在する蛋白質(P2、P5)をコードすること、さらにこれらがウイルス精製過程で脱落するすることが示唆された。まず、これをP2、P5に対する抗体を用いて証明した。RDV S2(一部)、S5(完全長)のcDNAをそれぞれ夜盗蛾培養細胞中で発現させた。P2のカルボキシル基末端半分(60 kDa)と89kDaのP5の大量発現が確認された。これらのRDV由来の蛋白質をウサギに免疫し、抗血清を得た。免疫電顕法を用いてこれらの抗体と粒子との反応性を調べた結果、P2血清は粒子と反応したが、P5血清は反応しなかった。次にウエスタン法を用いて精製粒子、精製コア(内殻)粒子との反応性を調べた。P2血清は精製粒子中の130 kD蛋白質と反応したが、コア粒子中には反応する蛋白質は検出されなかった。一方、P5血清は精製粒子中の89kDマイナ-蛋白質と反応した。また、この蛋白質はP5抗体によってコア粒子からも微量検出された。これらの結果から、P2は予想された通り粒子の外殻粒子に存在するがP5については外殻蛋白質ではなく内殻粒子を構成する微量成分であることが明らかになった。S5については従来S2と同様に外殻蛋白質をコードすると考えられてきた。しかし、興味深いことにコア蛋白質をコードすることが証明された。植物レオウイルスの中で遺伝子-産物の全ての対応が明らかとなったのはRDVが初めてであり、世界的に評価されうる大きな成果である。従って、P2とこれまでに外殻蛋白質と同定されているP8がヨコバイ培養細胞感染性を支配することが示唆された。2)ヨコバイ培養細胞株の樹立。木村の方法(1987年)によってツマグロヨコバイ卵細胞の株化を試みた。初代培養には成功したが、安定継代株はえられていない。今後、安定なヨコバイ培養細胞株を樹立し、P2・P8抗体を用いたRDVの感染中和試験を行う必要がある。また、RDVS2コードのP2を完全な状態で組み換えバキュロウイルス発現夜盗蛾細胞から精製し、その精製P2を用いて完全粒子の再構成系を確立する必要がある。

1) The results of the past and the results of other plants, S2, and S5 are the existence of particles on the surface. The purification process of るprotein (P2, P5) をコードすること, さらにこれらがウイルスで sheds するすることが された.まず、これをP2、P5に対するAntibodiesをproved by いてした. The cDNA of RDV S2 (part part) and S5 (full length) has been found in the cultured cells of Spodoptera exigua. P2's base terminal half (60 kDa) and P5's 89kDa were confirmed to be large. The protein and antiserum from which これらのRDV is derived are immune and antiserum. The immunoelectrochemical method used anti-antibody particles and anti-reactive anti-antibodies, and the results of P2 serum anti-particle anti-antibodies and P5 serum anti-anti-antibodies were used. The にウエスタン method uses いて refined particles, refined コア(inner shell) particles, and とのreflective をadjusted べた. P2 serum contains a 130 kD protein in the purified particles and a protein of 130 kD in the purified particles. On the one hand, the P5 serum contains 89kD protein in the purified particles and is the anti-reactive protein.また, このprotein and P5 antibody によってコアparticles and からもmicro-outputされた.これらのRESULT から、P2は yu want された通りparticle のshell particle にEXISTENCE するがP5 についThe outer shell protein is composed of the inner shell particles and the trace ingredients are the same. S5については従来 S2と同様に Shellproteinをコードすると卡えられてきた.しかし、interest deep いことにコアprotein をコードすることがprove された. Plants and vegetablesのはRDVが开めてであり、The world's にreview価されうる大きなachievement である.従って, P2 とこれまでにcoat protein と同定されているP8 がヨコバイThe infectivity of cultured cells を dominates することが Shows 唆された. 2) Establishment of TOKEN cultured cell lines. Kimura's method (1987) Test method of egg cells. The first generation of cultivation was successful, and the stable Ashiro strain was successful. From now on, it is necessary to stabilize the establishment of cultured cell lines and conduct neutralization tests of P2 and P8 antibodies against RDV infection.また, RDVS2 コードのP2をcomplete status で group み えバキュロウイルス発 appears in the night thief moth It is necessary to establish the system of complete particle reconstruction using cell purification and P2 purification.

项目成果

Suzuki,N: "Molecular analysis of rice dwarf phytoreovirus genome" Seminars in Virology. (in press).

Suzuki，N：“水稻矮化植物呼肠病毒基因组的分子分析”病毒学研讨会。

Suzuki,N and Others: "Immunodetection of rice dwarf phytoreovirus proteins in both plaut and insect hcots" Virology. 202. 41-48 (1994)

Suzuki，N 等人：“水稻矮化植物呼肠病毒蛋白在 plaut 和昆虫 hcot 中的免疫检测”病毒学。