癌細胞と腸間膜由来中皮細胞の相互作用により誘導される新規プロテアーゼの精製

癌细胞与肠系膜间皮细胞相互作用诱导的新型蛋白酶的纯化

• 批准号: 06856013
• 负责人: 三浦 豊
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06856013/
• 关键词: invasion; ascites hepatoma; matrix metalloproteasse; collagenase

本研究は、腹水肝癌AH109Aと腸間膜由来中皮細胞を共培養した際に誘導されるマトリックスメタロプロテアーゼを精製し、その性質を明らかにすることを目的とした。本酵素の精製に取り掛かる前に、その性質を詳細に再検討したところ、誘導される酵素は約62kDaのmajor bandと約68kDa、58kDaのminor bandの3種であることが明らかとなった。またあらかじめ有機水銀などの活性化剤とインキュベートした後に酵素活性を調べたところ、68kDaのものが58kDaのものに変換され、一方約62kDaのものが活性を失うことが確認された。そこで本酵素の基質特異性を再び検討するため、ゼラチン、TypeIコラーゲン、TypeIVコラーゲン、カゼインを基質としたZymographyを行ったところ、すべての分子量のものがカゼイン以外の基質に対して極めて強い分解活性を示した。しかしコラーゲンは温度によりその立体構造がゆるみ部分的にゼラチン化することが知られている。そこで、今回観察されたコラーゲン分解活性が部分的なゼラチン化により観察されたものかどうかを明らかにするためZymographyのインキュベート温度を低くしたところ、TypeIコラーゲン分解活性が消失した。以上の結果は、本酵素が活性型72kDa TypeIVコラゲナーゼと別の酵素の混合物である可能性を示唆している。そこで現在は72kDa TypeIVコラゲナーゼ抗体を用いて、確認を行ってる。一方、本酵素が誘導される機構に関しては、両細胞が接触することが必須であることを明らかにした。現在は、癌細胞の膜成分のみで誘導が起こるかを検討している。ここまでに明らかにされた事実は、癌細胞が正常細胞と接触した際に正常細胞側からのプロテアーゼの分泌を促進するという現象が起きていることを示唆しており、今後本酵素のcharacterizationとともに誘導機構を解析することで癌転移の分子機構の新たな一端が解明される可能性が考えられる。

In this study, ascites liver cancer AH109A and mesothelial cells derived from intestinal mesentery were co-cultured and induced.トリックスメタロプロテアーゼをRefinedし、その性を明らかにすることをPurposeとした. This enzyme's refined properties, detailed properties, and induced enzymes are approximately 62kDa, major band, approximately 68kDa, and 58kDa minor. Bandの3 kinds of であることが明らかとなった.またあらかじめorganic mercury などのactivated とインキュベートした后にEnzyme activity をadjusted べたところ, 68k Da のものが 58kDa のものに変change され, one side is about 62kDa のものがActive を Lost うことがConfirmed された.そこで本zyme's matrix-specific をび検恙るため、ゼラチン、TypeIコラーゲン、TypeIVコラーゲン、カゼインを matrixとしたZymography を行ったところ、すべてのMolecular weight のものがカゼイン Other than the matrix に対して extremely めてstrong い decomposition activity を Show した. The しかしコラーゲンはtemperature によりそのthree-dimensional structure がゆるみ part of the にゼラチン化することが知られている.そこで、Now let’s look at the されたコラーゲン decomposition active partゼラチン化により観草されたものかどうかを明らかにするためZymography のインキュベート Temperature を low くしたところ、TypeI コラーゲン decomposition activity がdisappeared した. The above results indicate that the active type of this enzyme, 72kDa Type IV enzyme, is a possible mixture of enzymes.そこでNow the 72kDa TypeIVコラゲナーゼantibody is used and confirmed. On the one hand, it is necessary to ensure that the enzyme is induced and the mechanism is closed and the cells are contacted. Now, the membrane components of cancer cells are induced and induced.ここまでに明らかにされた事実は, cancer cells, normal cells, and contact with normal cells The secretion of side secretion promotes the phenomenon of side secretion and promotes secretion. In the future, the characterization of the enzyme's induction mechanism and the analysis of the molecular mechanism of cancer migration will reveal the possibility of the new enzyme and its possibility.