テトラヒメナの新しいCa^<2+>結合蛋白質の研究

四膜虫新Ca^2+结合蛋白的研究

• 批准号: 08874118
• 负责人: 沼田 治
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08874118/
• 关键词: テトラヒメナ; カルシウム結合蛋白質; カルモデュリン; 細胞骨格; 接合; 受精; FK506結合蛋白質; カルシニューリン; カルシウムイオン; ダイニン; 繊毛

本研究はテトラヒメナの3種類のCa^<2+>結合蛋白質(分子量23,000と25,000のテトラヒメナCa^<2+>結合蛋白質[TCBP-23とTCBP-25]とカルモデュリン)の機能を解明することによって「Ca^<2+>が関与する生命現象がCa^<2+>結合蛋白質の分業体制によって制御されている。」という仮説を検証することを目的とする。本年度は以下のことを明かにした。1.接合過程の突然変異体を用いて、TCBP-25が微小管と共存して配偶核の交換と核融合(受精)に関与していることを明かにした。2.TCBP-23とTCBP-25は膜の裏打ち構造(エピプラズマ)に局在して116Kと130Kの蛋白質とCa^<2+>に依存して結合することを明かにした。116Kと130K蛋白質の精製を試み、エピプラズマをpH9.0の緩衝液で可溶化し、これらの蛋白質の精製に成功した。今後、TCBP-23、TCBP-25とこれらの蛋白質の相互作用を検討する予定である。3.Ca^<2+>カルモデュリンに依存して機能するフォスファターゼ、カルシニューリンの阻害蛋白質であるFK506結合蛋白質をテトラヒメナより発見した。FK506結合蛋白質は免疫抑制剤FK506と結合するとカルシニューリンの機能を阻害し、免疫担当細胞の働きを抑えることが知られている。テトラヒメナにもFK506結合蛋白質が存在することは、この蛋白質が普遍的な生理機能に関与することを示唆している。この普遍的な機能を明かにするためにテトラヒメナを用いてカルモデュリン-カルシニューリン-FK506結合蛋白質が関与する生理機能を明かにしたいと考えている。

In this study, the functions of three kinds of Ca^<2+> binding proteins (molecular weights 23,000 and 25,000) were studied.[TCBP-23 and TCBP-25] were used to explain the mechanism of Ca^<2+> binding proteins. The purpose of this article is: This year, the following is a summary of the results. 1. The process of conjugation is suddenly changed, and TCBP-25 is closely related to microtubule blue shift, mate nuclear exchange and nuclear fusion (fertilization). 2. TCBP-23 and TCBP-25 have a membrane structure that is dependent on Ca at 116K and 130K. The purification of protein at 116K and 130K was successfully carried out in buffer solution with pH 9.0. In the future, TCBP-23, TCBP-25 and their protein-protein interaction models will be discussed. 3. Ca ^<2+>-dependent protein function, FK506-binding protein, FK506-dependent protein, FK506-binding protein, FK5 FK506 binds to proteins that inhibit the function of immunosuppressive agents FK506 and immunosuppressive cells. FK506-binding protein exists, and this protein has universal physiological functions. The general function of FK506 binding protein is related to physiological function.

项目成果

Hanyu,K.,Numata,O.,Takahashi,M.and Watanabe,Y: "Immunofluorescence localization of a 23-kDa Tetrahymena calcium-binding protein,TCBP-23,in the cell cortex." J.Biochem.Vol.119. 914-919 (1996)

Hanyu,K.、Numata,O.、Takahashi,M. 和 Watanabe,Y：“23-kDa 四膜虫钙结合蛋白 TCBP-23 在细胞皮质中的免疫荧光定位。”

T.Takeda, Y.Watanabe, and O.Numata: "Direct demonstration of the bifunctional property of Tetrahymena 14-nm filament protein/citrate synthase following expression of the gene in Escherichia coli" Biochem.Biophys.Res.Commun.237. 205-210 (1997)

T.Takeda、Y.Watanabe 和 O.Numata：“在大肠杆菌中表达该基因后直接证明四膜虫 14 nm 丝蛋白/柠檬酸合酶的双功能特性”Biochem.Biophys.Res.Commun.237。

Watanabe,Y.,Hanyu,K.,Takemasa,T.and Numata,O: "TCBP-25.In Guidebook to the Calcium Binding-Proteins (Celio,M.R ed.)" Sambrook and ToozePublication at Oxford University Press, 4 (1996)

Watanabe,Y.、Hanyu,K.、Takemasa,T. 和 Numata,O：“TCBP-25.钙结合蛋白指南（Celio，M.R ed.）”Sambrook 和 Tooze 出版于牛津大学出版社，4（

O.Numata, K.Hanyu, T.Takeda, and Y.Watanabe: "Tetrahymena calcium-binding proteins,TCBP-25 and TCBP-23 in TETRAHYMENA THERMOPHILA(D.J.Asai,J.D.Forney eds.)" Academic Press,San Diego (in press), (1998)

O.Numata、K.Hanyu、T.Takeda 和 Y.Watanabe：“嗜热四膜虫中的四膜虫钙结合蛋白、TCBP-25 和 TCBP-23（D.J.Asai、J.D.Forney 编辑）”学术出版社，圣地亚哥（

Numata,O.,Yamazaki,A.and Watanabe,Y: "Tetrahymena 14-nm filament protein (49K protein) and citrate synthase are expressed by the same gene." Europ.J.Protistol.Vol.32 Suppl.1. 108-113 (1996)

Numata,O.、Yamazaki,A. 和 Watanabe,Y：“四膜虫 14 nm 丝蛋白（49K 蛋白）和柠檬酸合酶由同一基因表达。”