P4501A1遺伝子の転写制御を司るAhレセプターの構造と機能解析・・・遺伝子診断への応用・・・・

控制 P4501A1 基因转录的 Ah 受体的结构和功能分析...在遗传诊断中的应用...

• 批准号: 06857173
• 负责人: 伊藤 進
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06857173/
• 关键词: P450 1A1; チトクローム; Ahレセプター; Gal4; 転写制御

1)ヒトAhレセプター遺伝子を単離するために、ヒトAhレセプターcDNAをプローブとしてCharon4Aヒトゲノムライブラリーをスクリーニングした。スクリーニングの結果、2個の陽性クローンを単離した。得られた2つの陽性クローンの中で、5'上流領域を含むクローンλF2-45のEco RI断片をpUC18ベクターに組み込んだpUCF2-45を作製した。このプラスミドを用いて、5'上流領域を-1599までの塩基配列を決定した。Ahレセプター遺伝子は8個の転写開始点を有しており、その5'上流配列は、TATA boxが欠けていたが、一方複数のGC boxが存在しており、典型的なhouse keeping geneの構造を取っていた。Ahレセプター遺伝子の転写誘導が多環芳香族炭化水素である3-メチルコラントレンで起こるか否かをHep G2細胞で検討したところ、CYP1A1遺伝子の転写誘導は起こったが、Ahレエプター遺伝子の転写誘導は起こらなかった。2)Ahレセプターの転写活性化領域を調べるために、Gal4のcDNA結合領域とAhレセプターのN末端からの欠損させた遺伝子とを融合したキメラ遺伝子を作製して、CATアッセイを行った。その結果、N末端から221番目のアミノ酸よりC末端部分に転写活性化領域があると考えられた。非常に興味深いことに転写活性化領域として知られているglutaminrich regionを取り除いても、この転写活性は残存していることより、新たな転写活性化領域がC末端129の間にあると予測された。

1)ヒトAhレセプター伝子を単利するために、ヒトAhレセプターcDNAをプローブとしてCharon4A ヒトゲノムライブラリーをスクリーニングした.スクリーニングの results, 2 positive クローンを単leave. Get られた2つのpositive クローンの中で, 5' upper range をcontaining むクローンλF2-45のEco The RI fragment is made of pUC18 pUCF2-45 group. The このプラスミドを uses いて, 5' upper range を-1599 までの婩婩 basis arrangement をdetermines した. Ahレセプター伝子は8の転写start点を有しており, その5' high-ranking arrangement は, TATA box owed けていたが, one party plural GC Box が existence し て お り, typical な house keeping gene の structure を take っ て い た. Ahレセプター缝子の転WRITE inducing polycyclic aromatic carbonized water element である3-メチルコラントレンで出こるか不かをHep In G2 cells, it is easy to write and induce, and CYP1A1 is induced by the expression of the remaining genes. 2) Ah レセプターの転 activating field を tone べるために、Gal4 のcDNA binding field とAh レセプターのN Terminal からの无码させた伝子とをfusion したキメラ伝子を产して, CATアッセイを行った.そのRESULTS, N-terminal から221st chapter のアミノ acid よりC-terminal part に転writes the activation field があると考えられた. It's very interesting and interesting to write about the activation field and it's glutaminrich Region をtakes out いても, この転WRITE ACTIVITY は remains していることより, たな転WRITE ACTIVATION REGION がC-terminal 129 の间 にあると ESTABLISHED された.

项目成果

Tsutomu Sakuma et al.: "Sex-related Differences in the Expression of Cytochrome P450 IN Hamster : cDNA Cloning and Examination for the Expression of Three Distinct Cyp2c cDNAs" Mol.Pharmacol.45. 228-236 (1994)

Tsutomu Sakuma 等人：“仓鼠中细胞色素 P450 表达的性别相关差异：cDNA 克隆和三种不同 Cyp2c cDNA 表达的检查”Mol.Pharmacol.45。

Hisashi Harada et al.: "Structure and Regulation of the Human Interferon Regulatory Factor I (IRF-1) and IRF-2 Genes : Implications for a Gene Network in the Interferon System" Mol.Cell.Biol.14. 1500-1509 (1994)

Hisashi Harada 等人：“人干扰素调节因子 I (IRF-1) 和 IRF-2 基因的结构和调节：对干扰素系统中基因网络的影响”Mol.Cell.Biol.14。

伊藤 進: "ダイオキシンと結合する転写制御因子" ファルマシア. 30. 633-634 (1994)

Susumu Ito：“与二恶英结合的转录控制因子”Pharmacia 30. 633-634 (1994)。

Eiji Kashiyama et al.: "Stereoselective S-Oyidation of Flosequinan Sulfide by Rat Hepatic Flavin-cantaining Monooxygenase 1A1 Expressed in Yeast" Biochem.Pharmacol.47. 1357-1363 (1994)

Eiji Kashiyama 等人：“在酵母中表达的大鼠肝含黄素单加氧酶 1A1 对硫喹南的立体选择性 S-氧化”Biochem.Pharmacol.47。

Yashiki Takahashi: "Characterization of the Human Ah Receptor Promoter in Human Liver Cell Line,HePG2" Pharmacogenetics. 4. 219-222 (1994)

Yashiki Takahashi：“人肝细胞系中人 Ah 受体启动子的表征，HePG2”药物遗传学。