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血管内皮の張力刺激に対するストレスファイバー形成メカニズムの解明

阐明响应血管内皮张力刺激的应力纤维形成机制

基本信息

批准号：
06858078
负责人：
武政徹
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

血管内皮の張力を受けストレスファイバーを形成し、しっかりと下部組織にはり付く過程で、何がおこっているのかを分子生物学的に探るのが本研究の目的である。阻害剤を使った予備的な実験で、血管内皮細胞の張力刺激に対するストレスファイバー形成に蛋白質のリン酸化が必須である事が示唆された。そこでまずラット生体から取り出した血管を用い、リン酸化チロシン抗体を使って張力刺激とリン酸化との因果関係を蛋白化学的に調べたところ、張力刺激により、90kDa付近の蛋白質(のチロシン残基)がリン酸化されることがわかった。さらにこの蛋白質の詳細な分子生物学的解析をするにあたっては、ラットから取りだした血管の内皮は量的にもまた精製度から言ってもそのまま使うには材料として不適当であると考えられた。そこで今回はヒト臍帯の静脈から血管内皮細胞の培養系を樹立しそれを薄いシリコンラバー上に培養して進展させ、まず上記のIn situの実験がIn vitroで再現できるか試みた。実際はステッピングモーターを使った培養細胞伸展装置を作成するのにかなりの時間をかけてしまったが、装置を完成させ、血管内皮細胞に継続的、もしくは周期的な張力刺激を与えることによって生体から取り出した血管と同じような形態変化を起こすことに成功した。今後は張力刺激を受けた細胞から蛋白質を抽出し、注目しているリン酸化蛋白質を電気泳動で分離同定後、切り出してアミノ酸配列を決定し既存の蛋白質と比較する。その後、新蛋白質であれば合成ペプチドで抗体を作らせ蛋白質の性質を明らかにするとともに、その抗体を使ってライブラリーをイムノスクリーニングにかけ、遺伝子をクローニングし、分子生物学的解析を進めていく予定である。

The tension of the vascular endothelium is affected by the formation of the tension of the vascular endothelium and the tension of the underlying tissue The purpose of this study is the process of molecular biology and the purpose of this study. Preparation of inhibitory effects and tension stimulation of vascular endothelial cells It is necessary for the acidification of protein to form a protein.そこでまずラット生からtake out the vascular を use い, リン acidified チロシン antibody を make って tension stimulation とリン acidified とのcausal を protein Chemical にべたところ, tension stimulation により, 90kDa close protein (のチロシン residue) がリン acidified されることがわかった. Analysis of molecular biology of proteins and proteins in detail The quality of the inner skin is not the same as the fineness of the material, so the quality of the material is not appropriate. The culture system of vascular endothelial cells has been established in the umbilical cord and the culture system has been established. situの実験がIn vitroでReproductionできるかtestみた.実记はステッピングモーターをったCulture Cell Expansion Deviceをmadeするのにかなりの时をかけてしまったが、Device completedさせ、vascular endothelial cells The tension stimulation of the cells and the cycle of the cells and the living body of the cells The same as the じような form change をrise こすことにsuccess した. In the future, the cells that are stimulated by tension will be extracted and the proteins will be extracted and the proteins will be acidified. After separation and determination by electrophoresis, the existing proteins were determined and compared by cutting out the acid composition. After その, the new protein であればsynthetic ペプチドでantibodies を作らせProtein properties を明らかにするとともに, そのantibodies をmake ってライブラリーをイムノスクリーニングにかけ、弝子をクローニングし, Molecular Biology Analysis を enter the めていく杧ある.